ICS65.020.01 CCS B43 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5200—2020 穿山甲物种鉴定技术规范 Protocol for species identification of Manis Spp. 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5200-2020 穿山甲物种鉴定技术规范 1范围 本文件规定了中华穿山甲、马来穿山甲、印度穿山甲、南非穿山甲、大穿山甲、长尾穿山甲和 树穿山甲等物种的形态特征和SYBR Green I实时荧光PCR鉴定方法，以及根据PCR产物测序结果和 序列分析对比判定穿山甲物种种类的方法. 本文件适用于中华穿山甲、马来穿山甲、印度穿山甲、南非穿山甲、大穿山甲、长尾穿山甲和 树穿山甲及其产品的物种鉴定. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测. 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. Cytb:细胞色素氧化酶b(cytochrome b) DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid) dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate) Real-time PCR:实时荧光聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction) SDS:十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate) 4形态特征 中华穿山甲、马来穿山甲、印度穿山甲、南非穿山甲、大穿山甲、长尾穿山甲和树穿山甲成体 典型形态特征见附录A. 中华穿山甲、马来穿山甲、树穿山甲以及大穿山甲四种穿山甲鳞片典型形态特征见附录. 根据上述特征，可初步鉴别活体穿山甲或疑似穿山甲鳞片样品的物种种类，精确鉴定应进一步 核酸扩增、测序检测确定物种. 5Real-time PCR检测 5.1仪器与设备 5.1.1Real-time PCR仪. SN/T5200-2020 5.1.2 组织研磨器. 5.1.3 超净工作台. 5.1.4 制冰机. 5.1.5 高速冷冻离心机. 5.1.6 水浴锅. 5.1.7 台式小型离心机. 5.1.8 常规冰箱. 5.1.9旋涡混匀器. 5.1.10电泳仪. 5.1.11 凝胶成像系统. 5.1.12微量可调移液器(10L、100μL、1000L)及配套吸头. 5.2试剂与材料 5.2.1无水乙醇. 5.2.2蛋白酶K(2...
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