SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1146.2-2009 烟草环斑病毒分子生物学检测方法 Molecular detection of Tobacco ringspot virus 2009-09-02发布 2010-03-16实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 数码防份 SN/T1146.2-2009 前言 本标准的附录B、附录C和附录D均为规范性附录，附录A为资料性附录. 本标准由认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准由中华人民共和国上海出入境检验检疫局负责起草、中国检验检疫科学研究院参加起草. 本标准主要起草人：杨翠云、于翠、魏梅生、高辉、乔艳艳. 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准. I SN/T1146.2-2009 烟草环斑病毒分子生物学检测方法 1范围 本标准规定了烟草环斑病毒分子生物学检测的基本原则和方法. 本标准适用于无性繁殖材料、组培苗、鳞球茎和种子苗木中携带的烟草环斑病毒的检测. 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. SN/T1146烟草环斑病毒检疫鉴定方法 3原理 3.1烟草环斑病毒学名及分类地位 中文名：烟草环斑病毒 英文名：Tobacco ringspot virus 缩写：TRSV 分类地位：豇豆花叶病毒科(Comoviridae) 线虫传多面体病毒属(Nepovirus). 3.2烟草环斑病毒基因组 基因组含两条SsRNA.RNA-1长7.514kb;RNA-2长3.929kb 外壳蛋白基因1.548kb. 其他资料参见附录A. 4仪器设备、用具和试剂 4.1仪器设备 PCR仪、实时荧光定量PCR仪、超净工作台、电子天平(1/10000g)、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系 统、水浴锅、高速冷冻离心机、一80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、微波炉、漩涡振荡器. 4.2用具 可调式微量移液器(2μL、10μL、100uL、200μL、]000μL、5000μL)及相应的无RNase吸头、无， RNase离心管、PCR管和研钵等. 4.3试剂 RT-PCR试剂（见附录B)、ICRT-PCR试剂（见附录C)和实时荧光RT-PCR试剂（见附录D). 5病毒检测 抽样与制样方法按照SN/T1146规定的方法执行. 采用RT-PCR(见附录B)、IC-RT-PCR(见附录C)和实时荧光RT-PCR(见附录D)进行病毒检测. 6结果判定 样品经RT-PCR、IC-RT-PCR和实时荧光RT-PCR三种方法之一检测为阴性时，证明样品不携带 烟草环斑病毒. 样品经RT-PCR和IC-RT-PCR检测为阳性，需要进行序列测定，如果序列测定结果证实与所检测 ...
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