ICS65.020.30 B41 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T7229-2019 鲤浮肿病诊断规程 Code of diagnosis for carp edema virus disease(CEVD) 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 SC/T7229-2019 品标准 前 公共服务平台 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起 全国农明 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任. 本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口. 本标准起草单位：全国水产技术推广总站、北京市水产技术推广站. 本标准主要起草人：徐立蒲、余卫忠、张文、曹欢、王静波、王姝、潘勇、张锋、梁艳、王立新、李清. I SC/T7229-2019 鲤浮肿病诊断规程 1范围 本标准给出了鲤浮肿病的缩略语、试剂和材料、仪器和设备及临床症状，规定了采样、核酸检测及综合 判定. 本标准适用于鲤浮肿病的流行病学调查、诊断、监测和检疫 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不 用文件，仅注日期的版本适用于本文件. 凡是不注日期的引用文件，其最新版 GB/T6682分析实验室小规格和试验方 .HN 包括的修改 GB/T18088出人境动海检度采 SC/T7103水生动物产地检瘦采技术规范 3缩略语 下列缩略语适用干本文件 CEV鲤浮肿病carp edema sitC CEVD:鲤浮肿Kcarp cdemu virus disease CEVD) RESEARCH 4试剂和材料 2 4.1CEV阳性物质，由农业衣村部指定的水生动物病原物 南种保藏机构提供. 4.2水：符合GB/668中级水的要求 4.3无水乙南：分.使用前顶跨到20℃ 4.4荧光PCR2X预合液(2 probe naster mix) 商业武剂，一20保存 4.5套式PCR2X预液(2 mnster miy) 商业试剂、20（保在 3⊥N3O 4.6环介导等温扩增2×友应级冲液.商业试剂、20℃保存 4.7Bst酶：一20℃保存，酶浓度为8L避兔反复冻 4.8引物：荧光PCR和套式PCR引物浓度为10o1/1AMP引物浓度为100mol/L 一20℃保存. 4.8.1荧光PCR引物 上游引物qF1:5'-AGTTTTOTARATTGTAGCATTTCO3: 下游引物qR1:5'-GATTCCTCAAGGAGTTDCAGTAAA-3'; 探针：5'-FAM-AGAGTTTGTTTCTTGCCATACAAACT-BHQ1-3': 扩增CEVP4a蛋白基因中76bp的片段. 4.8.2套式PCR引物 4.8.2.1F1和R1扩增CEVP4a蛋白基因中的548bp片段，F2和R2从该片段中再扩增180bp片段. 上游引物F1:5'-GCTGTTGCAACCATTTGAGA-3': 下游引物R1:5'-TGCAGGTTGCTCCTAATCCT-3'; 上游引物F2:5'-GCTGCTGCACTTTTAGGAGG-3': 下游引物R2:5'-TGCAAGTTATTTCGATGCCA-3'. 4.8.2.2BF和BR扩增CEVP4a蛋白基因中的528bp片段，IF和IR从该片段中再扩增478bp片段. 上游引物BF:5'-ATGGAGTATCCAAAGTACTTAG-3': 1 ...
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