ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T27637-2011 副结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法 Real-time PCR method for the detection of Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis 2011-12-30发布 2012-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T27637—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、吉林农业大学、北京盈九思科技发展有 限公司. 本标准主要起草人：刘中勇、陈茹、杨国海、高云航、曾碧健、朱道中、吴晓薇、高小博， I GB/T27637—2011 副结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法 1范围 本标准规定了副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis)实时荧光PCR检 测方法的技术要求和操作规范. 本标准适用于快速检测培养物、血样、奶样、粪便和组织等临床样品中副结核分枝杆菌， 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 GB19489一2008实验室生物安全通用要求 3缩略语 下列缩略语适用于本文件. Ct值：荧光信号量达到设定的阙值时所经历的循环数. dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate 脱氧核苷三磷酸. DMSO:dimethyl sulfoxide 二甲基亚矾. EDTA:ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸. PBS:phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液. PCR:polymerase chain reaction 聚合酶链式反应. Taq酶：Taq DNA聚合酶. UDG酶：uracil DNA glycosylase 尿密啶DNA糖基化酶. 4原理 本标准方法采用了TagMan探针实时荧光PCR技术原理.反应体系中包括一对用于扩增DNA 的引物，和一条能与PCR产物特异杂交的荧光标记探针.探针的5’端标记了被称为报告基团的荧光 素，3’端标记了灭基团.在进行PCR延伸反应时，Taq酶的5’外切酶活性将5’端荧光基团从探针上 切割下来，使其与淬灭基团分离，从而仪器能检测到5’端荧光基团所发出的荧光信号，一分子PCR扩 增产物的生成伴随一分子荧光信号的产生.随着扩增循环次数的增加，仪器检测到的荧光信号的累积 反应了扩增产物量的变化.本标准方法以副结核分枝杆菌特异的F57基因序列为模板，设计特异扩增 引物和探针建立荧光PCR反应体系. 5材料与试剂 5.1仪器与耗材 5.1.1接种棒. 1 ...
GB/T 27637-2011 副结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法.pdf
