ICS67.080 B23 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1963-2010 马铃薯品种鉴定 Cultivar identification of potato 2010-12-23发布 2011-02-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T1963-2010 马铃薯品种鉴定 1范围 本标准规定了马铃薯品种鉴定SSR分子标记方法 本标准适用于马铃薯品种及种质资源鉴定. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注目期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB7331马铃薯种薯产地检疫规程 GB18133马铃薯脱毒种薯 3试剂 DNA的提取及PCR扩增所使用的实验室独立，微量移液器为分子检测专用.试验中，溴化乙锭染 色剂可诱发基因突变，丙烯酰胺水溶液具有神经毒性，操作人员在操作过程中需佩戴手套和口罩.电泳 后的凝胶以及被溴化乙锭污染的物品要有专用收集处，集中进行无害化处理. 以下所用试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682中规定的一级水. 3.11mol/L三羟基甲基氨基甲烷一盐酸(Tris-HC1)溶液(pH8.0) 称取Tris碱121.1g 溶解于800mL水中，用浓盐酸调pH至8.0，加水定容至000mL 121℃高 压灭菌20min. 3.20.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0) 称取乙二铵四乙酸二钠186.1g 溶于700mL水中，用氢氧化钠调pH至8.0，加水定容至1000 mL. 3.3TE缓冲液(pH8.0) 量取1mol/L三羟基甲基氨基甲烷一盐酸(Tris-HCI)溶液(3.1)2mL、0.5mol/L乙二铵四乙酸二 钠溶液(3.2)0.4mL 加水溶解，定容至200mL 121℃高压灭菌20min后：室温保存. 3.45×Tris硼酸(TBE)电泳缓冲液 称取Tris碱27g、硼酸13.75g 量取0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(3.2)10mL 加灭菌双蒸 水400mL溶解，定容至500mL. 3.51 XTris-硼酸(TBE)电泳缓冲液 量取5 XTris-硼酸(TBE)电泳缓冲液(3.4)200mL 加水定容至1000mL. 3.6样品提取缓冲液 称取氯化钠15.2g、十二烷基磺酸钠(SDS)0.4g、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)2g、二硫苏糖醇(DTT) 0.309g 溶于100mL双蒸水中，再加人0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(3.2)20mL、1mo1/L三羟 基甲基氨基甲烷一盐酸(Tris-HC1)溶液(3.1)20mL、Tritron X1001mL、8巯基乙醇0.8mL 混合均 匀，加水定容至200mL 4℃贮存待用. 3.7Tris饱和酚十三氯甲烷十异戊醇混合液（现用现配） 量取Tris饱和酚25mL、三氯甲烷24mL、异戊醇1mL 混合均匀待用. 1 NY/T1963-2010 3.830%丙烯酰胺溶液 称取丙烯酰胺29g、N N-亚甲基双丙烯酰胺1g 加水溶解，定容至100mL 过滤，4℃储存. 3.910%过硫酸铵溶液（现用现配） 称取0.1g过硫酸铵，加水溶解，定容至1mL. 3.1012%聚丙烯酰胺凝胶（双板） 量取30%丙烯酰胺溶液(3.8)20mL、5 XTris-硼酸(TBE)电泳缓冲液(3.5)10mL、灭菌双蒸水25 L、四甲基乙二胺(TEMED)50uL 混匀，制板前加过硫酸铵溶液(3....
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