NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T4887-2025
植物源性食品中-氨基丁酸含量的测定 高效液相色谱法
Determination of aminobutyric acid in foods of plant origin byhigh performance-Liquid chromatography method
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农产品质量安全监管司提出.
本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口.
本文件起草单位：北京市营养源研究限公司、农业农村部食物与营养发展研究所、内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司、内蒙古伊利实业集团股份有限公司、中国农业科学院农产品加工研究所、北京工商大学、黑龙江飞鹤乳业有限公司、北京臻味坊食品有限公司、北京京瓦农业科技创新中心、北京市农林科 学院农产品加工与食品营养研究所.
本文件主要起草人：崔亚娟、朱大洲、潘玲、顾海华、张误惟、孔凡华、白沙沙、许洪高、宋晓东、马文丽、李翠枝、陈素敏、刘璇、许朵霞、刘野、王象欣、耿德胜、彭珍、郭斗斗、刘光敏
植物源性食品中Y-氨基丁酸含量的测定高效液相色谱法
1范围
本文件规定了植物源性食品中Y氨基丁酸含量的高效液相色谱测定方法.本文件适用于植物源性食品中Y-氨基丁酸含量的测定.补充线性范围信息.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法.
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样经乙醇-水溶液提取，经4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯（DABS-CI）衍生，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量.
5试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1无水乙醇（CHOH）：优级纯.5.1.2甲醇（CHOH）：优级纯.5.1.3甲醇（CHOH）：色谱纯.5.1.4乙晴（CHCN）：色语纯. 5.1.5碳酸氢钠（NaHCO）.5.1.6三水合乙酸钠（CH COON 3HO).5.1.74-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯（CHCINOS）：简称DABS-C1
5.2.1乙醇水溶液：无水乙醇水=64（VV)，取无水乙醇（5.1.1)600mL和水400mL，混匀.用水定容，混匀，现配现用.（5.1.4）溶解后，转移至10mL棕色容量瓶中，用乙晴（5.1.4）定容，混匀，现配现用.滤膜过滤.
5.2.2碳酸氢钠溶液（0.04g/mL）：称取碳酸氢钠（5.1.5）0.40g.用水溶解后，转移到10mL容量瓶中，5.2.34-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯溶液（2.0mg/mL）：称取DABS-C1（5.1.7)20.0mg，用乙晴5.2.4乙酸钠溶液（6.8mg/mL）：称取三水合乙酸钠（5.1.6）3.40g-用水溶解并稀释至500mL，经微孔
5.3标准品
5.3.1y-氨基丁酸（Y-aminobutyric acidGABA.C HNO;，CAS号：56-12-2）：纯度≥99 9%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
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5.4标准溶液配制
5.4.1标准储备液（1000μg/mL)：称取Y-氨基丁酸（5.3.1)10.0mg（精确至0.1mg）.用无水乙醇（5.1.1）溶解后，转移到10mL棕色容量瓶中，用无水乙醇（5.1.1）定容至刻度.标准储备液储存于密闭棕色玻聘瓶中，于一18C中冷冻保存，有效期3个月.
5.4.2标准工作液：分别移取标准储备液（5.4.1)0.25ml、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、3.00mL于50mL.棕色容量瓶中.用乙醇水溶液（5.2.1）定容至刻度，得到浓度为5.00mg/ml.10.00μg/ml、20.00 yμg/mL. 30 00 μg/mL 40 00 μg/ml. 60 00μg/mL 的系列标准工作液，现用现配.
5.5.1有机系微孔滤膜：孔径为0.45gumm5.5.2网筛：孔径为0.425mm.
6仪器与设备
6.1天平：感量0.00 1 g和0.000 01 g.6.2高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或性能相当的检测器.6.3离心机：转速≥5000r/min.6.4涡旋混合器.6.5数控超声波清洗器.6.7匀浆机. 6.6振荡水浴锅，6.8高速粉碎机.
7分析步骤
7.1试样制备
体等样品采用匀浆机匀浆混匀置于一18C冷冻保存备用：固体样品采用高速粉碎机粉碎，过0.425mm 样品取可食部分进行制备，均匀的液体样品混匀后直接取样：带悬浮物的液体样品、新鲜果蔬、半固网筛后，储存备用.
7.2试样处理
7.2.1提取
称取干样1.0g~2.0g，鲜样2.0g~5.0g（精确至0.001g）于50mL离心管中，加人乙醇水溶液（5.2.1)10mL 超声提取30min，涡旋混匀器上振荡2min，静置5min，5000r/min离心5min，上清液 转人25mL容量瓶中，残渣再用10mL提取溶液提取一次，合并2次提取液，用乙醇水溶液（5.2.1）定容至25mL，摇匀，待衍生化.
7.2.2衍生化
准确吸取1mL试样溶液或标准工作溶液于具塞试管中，加人0.2mL碳酸氢钠溶液（5.2.2）和0.4ml4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯溶液（5.2.3）.混匀后在70C水浴中衍生反应20min，用微孔滤膜 （5.5.1）过滤，待测.
7.3测定
7.3.1仪器参考条件7.3.1.1色谱柱：C柱，150mm×4.6mm5μm.或具同等性能的色谱柱；7.3.1.2柱温：30C；7.3.1.3流动相：乙晴（5.1.4)乙酸钠溶液（5.2.4)(3565）；7.3. 1.4流速：1. 0 mL/min
7.3.1.5检测波长：436nm
7.3.1.6进样量：10pl.
7.3.2标准曲线的制作
面积为纵坐标，绘制标准曲线. 将系列标准工作液分别注人液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰
7.3.3样品的测定
液的色谱峰进行定性，外标法定量，Y氨基丁酸标准溶液液相色谱图见附录A.
8分析结果的表述
试样中Y氨基丁酸含量按公式（1)计算.
=×V×1000m × 1000
式中：
-试样中Y-氨基丁酸含量的数值单位为毫克每千克（mg/kg）：--根据标准曲线计算得到的y-氨基丁酸质量浓度的数值，单位为微克每毫升（μg/mL）；V试样溶液定容体积的数值，单位为毫升（mL)；m-测试样品称样质量的数值，单位为克（g）； 以2次测定结果的算术平均值表示，计算结果保留3位有效数字.
9精密度
9.1重复性
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
9.2再现性
在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
10检出限和定量限
0. 10 mg/kg. 当样品取样量为5.0g，定容体积为50mL时，Y-氨基丁酸的检出限为0.03mg/kg，定量出限为
