ICS 13.020.01 CCS Z 00/09 团 体 标 准
T/CSES148-2024 水生生物环境DNA实验室建设技术要求
Technical requirements for the construction of aquatic organism environmental DNA laboratory
2024-07-10发布
2024-07-10实施
中国环境科学学会 发布
目次
前言 引言 1范围 2规范性引用文件 3术语和定义 4总体原则 5分区设置要求 6实验室操作要求 7房屋配件、实验室辅助设施基本要求 附录A（资料性）环境DNA实验室典型布局图 参考文献
T/CSES 148-2024
前言
本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中国环境监测总站提出。
本文件由中国环境科学学会归口。
本文件起草单位：中国环境监测总站、南京师范大学、南京大学、南京易基诺环保科技有限公司、 生态环境部南京环境科学研究所、江苏省环境监测中心、河南省济源生态环境监测中心。
本文件主要起草人：王延军、姚志鹏、杨江华、陈亚男、孙品莹、张效伟、王志浩、刘允、陈鑫、母亚雯、 谢玉为、沈嘉豪、张宗可、王亮、刘清旺、何宇慧、仲雨晴、张丽、马钰莹。
T/CSES148-2024
引言
生维管植物、大型底栖无脊椎动物和鱼类等水生生物的精准监测。
环境DNA实验室建设的规范化可 为环境DNA水生生物监测方法的标准化提供良好的条件与保障。
为促进环境DNA技术的标准化以及在我国生物多样性监测体系中的应用推广，规范水生生物环 境DNA实验室建设，制定本文件。
T/CSES 148-2024
水生生物环境DNA实验室建设技术要求
1范围
本文件确立了环境DNA实验室建设的总体原则，规定了实验室分区、实验室操作、房屋配件、实验 室辅助设施等方面的技术要求。
本文件适用于环境DNA实验室的新建、改建和扩建的设计、建设，包括但不限于环境监测中心、高 校和第三方检测机构等。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文
本文件。
GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法 GB/T15481-2000检测和校准实验室能力的通用要求
GB/T19489-2008实验室生物安全通用要求 GB/T32146.1一2015检验检测实验室设计与建设技术要求第1部分：通用要求 T/CSES80-2023淡水生物DNA条形码构建技术规程 T/CSES812023淡水生物监测环境DNA宏条形码法 T/CSES82-2023基于环境DNA的淡水生物评价技术指南
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 水生生物aquatic organism 生活史的全部或部分生活在各类水体中的动植物。
3.2 环境DNAenvironmental DNA:eDNA 环境介质（水、土壤、沉积物、周丛生物、生物膜、空气等）或从水体中初步富集或分选的混合生物组 织中赋存的脱氧核糖核酸（DNA）， [来源：T/CSES81-2023,3.2.有修改] 3.3 环境DNA实验室environmental DNA laboratory 可从各类环境介质中分离、纯化生物遗传物质，并利用高通量测序、定量PCR、数字PCR等技术实 现物种定性和DNA定量检测的实验室。
T/CSES 148-2024
4总体原则 4.1基本原则 4.1.1环境DNA实验室建设宜符合GB/T32146.1-2015规定的规划设计和系统设计要求。
4.1.2环境DNA实验室宜设功能分区，每周使用1.5%次氯酸钠对工作环境消毒，包括地面、台面、设 号 4.1.3工作区域温度、相对湿度及洁净度等级要求宜符合GB50346一2011中规定的一级实验室技术 指标。
4.1.4实验室工作人员宜自觉遵守实验室规章制度，在各分区进行试验操作时要做好个人防护（穿戴 隔离衣、口罩、手套、护目镜等）。
4.2通用原则 环境DNA实验室的功能布局、分区隔离、空调通风系统、气流控制等宜以避免DNA污染为首要 原则。
a）实验室宜以室为单元，进行布局规划和功能分区，一般包括以下单元：试剂制备和储存室、前处 理室、DNA提取纯化室、核酸检测室、质量控制室和数据分析室。
受条件限制的实验室，试剂 制备和储存室可与其他具备类似功能的实验室共用。
环境DNA实验室的典型布局图见附 录A。
b）试剂制备和储存室、DNA提取纯化室、核酸检测室和质量控制室宜具备移液、涡旋振荡、瞬时 离心功能.移液器需包含1pL~10μL、1L~20μL、20pL~200μL和100L~1000L 的规格，根据需求选配0.1μL~2.5μL、1μL~100μL或其他规格移液器。
涡旋振荡速度通常 不小于1000r/min，瞬时离心速度不小于1000r/min c）遵守单向工作流程：前处理室→DNA提取纯化室→核酸检测室。
d）有条件的实验室宜在各工作区域设置缓冲间。
5分区设置要求
5.1试剂制备和储存室 应具备纯水制备、冷冻/冷藏储存、称量、磁力搅拌、制冰和水浴等功能。
纯水应符合GB/T6682- 2008中一级水制备的规定，去离子水的电阻应达到18.2Ω。
冷冻储存需具备一20C条件，冷藏储存需 具备4℃条件.称量精度为万分之一。
磁力授拌转速应不小于2000r/min，制冰机出冰速度应不低 于30kg/d。
水溶温度最大允许误差为土0.5℃。
面积应不小于5m². 5.2前处理室 应具备样品储存、水样过滤、冻干、称量、组织处理和烘干等功能。
样品储存需满足4C和一20℃ 储存条件。
不同类型样品应设置不同操作区，如环境水样处理区，土壤、沉积物样品处理区，生物组织样 品处理区等，水样过滤功能需适配一体化环境DNA过滤器，负压应达到一0.9kPa以下，宜具备废液 直排功能。
土壤、粪使、沉积物冷冻干燥的温度应不高于一40℃，干燥过程中的升华温度应不高于 60C。
称量功能应符合5.1要求。
烘箱温控范围应满足室温到300℃，温度控制精度最大允许误差 为土0.5℃，烘箱容积不小于1001。
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