T/WJWCHCA 中国医药卫生文化协会团体标准
基于多重PCR的呼吸道感染病原体靶向 二代测序检测技术规范
Technical specification for targeted next-generation sequencing detection ofrespiratory infection pathogens based on multiplex PCR
（发布稿）
中国医药卫生文化协会 发布
目次
前言引言.1范围.2规范性引用文件3术语和定义4缩略语.5技术应用，6实验原理，7实验室分区、仪器设备及试剂8性能验证或性能确认9分析前10分析中 1o11分析后12质量控制.附录A（资料性） 呼吸道感染病原体靶向二代测序申请单模板 14附录B（资料性） 呼吸道感染病原体靶向二代测序检测报告模板参考文献， 16
前言
草. 本标准参照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
请注意本标准的某些内容可能涉及专利.本标准的发布机构不承担识别专利的责任.
本标准由中国医药卫生文化协会提出并归口.
本标准起草单位：广州金域医学检验集团股份有限公司、北京友谊医院、中南大学湘雅二医院、长沙金域医学检验实验室有限公司、武汉儿童医院、重庆医科大学附属第二医院、江苏省人民医院、广州医科大学附属第一医院、广州金域医学检验中心有限公司、广州国家实验室、广东省呼吸与健康学会.
本标准主要起草人：余艳、赵晓涛、胡敏、李培、陆小霞、胡鹏、张磊、姚欣、关文达、李慧源、梁萍、马常钧.
引言
病仍是威胁人类健康的主要疾病之一.其中，呼吸道感染是临床上最常见的感染性疾病，可分为上呼吸 随着新发和再发病原体的不断涌现、耐药性问题日益严重以及免疫功能低下人群的增加，感染性疾道感染和下呼吸道感染.病原学的快速检测和准确诊断是感染性疾病有效治疗的重要前提.传统的病原存在诸多局限性.近年来，分子诊断技术，特别是二代测序（next-generation sequencing，NGS）技 学检测手段主要包括显微镜检查、培养、血清学试验、传统分子生物学方法（如PCR）等，但这些方法术的迅猛发展，极大推动了感染性疾病的精准诊治.
针捕获等方法富集后，检测标本中特定靶标核酸的技术.在病原学检测领域，tNGS技术能够一次性检测 靶向二代测序（targetednext-generation sequencing，tNGS）是一种基于多重PCR特异扩增或探标本中特定的几十至几千上万种特定病原体及其毒力基因和/或耐药基因.与直接从临床标本中提取核酸进行测序分析、一次性覆盖检测病毒、细菌、真菌和寄生虫等多种病原体的宏基因组二代测序 （metagenomic next-generation sequencing，mNGS）相比，tNGS具有灵敏度受宿主核酸影响较小、性价比高等特点.
性能等均存在差异，给报告单解读和临床应用带来了不小的挑战.目前尚未有相关的政策或标准来规范 目前，市场上已有众多医疗机构提供病原体tNGS检测服务，不同机构的术语定义、检测流程和检测检测流程，因此迫切需要制订规范的技术要求及标准.鉴于此，国内多位具有丰富临床、检验和产业经验的专家学者共同参与，参考国内外相关标准、指南与专家共识，结合tNGS检测技术特点，就病原体tNGS 技术要求和操作规范达成共识，指导和规范tNGS在呼吸道感染病原体检测中的应用.
基于多重PCR的呼吸道感染病原体靶向二代测序检测技术规范
1范围
本标准规定了采用基于多重PCR的靶向二代测序技术进行呼吸道临床标本病原体检测（包括分析前、分析中和分析后）的方法和程序，以及性能验证或性能确认和质量控制等.
本标准适用于采用基于多重PCR的靶向二代测序技术进行呼吸道临床标本病原体检测的医疗机构.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 标准.
GB/T22576.1医学实验室质量和能力的要求第1部分：通用要求GB/T29791.1体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第1部分：术语、定义和通用要求 GB/T30989高通量基因测序技术规程GB/T39367.1体外诊断检验系统病原微生物检测和鉴定用核酸定性体外检验程序第1部分：通用要求、术语和定义
WS/T640临床微生物学检验样本标本的采集和转运
WS/T805临床微生物检验基本技术标准
3术语和定义
GB/T29791.1-2013、GB/T39367.1-2020界定的以及下列术语和定义适用于本标准.
3.1
呼吸道感染respiratoryinfection
由病毒、细菌、真菌、寄生虫、支原体、衣原体等病原体引起的呼吸道的感染.注：可分为上呼吸道感染与下呼吸道感染.上呼吸道感染指累及鼻腔、咽/喉部等的感染，多由病毒引起：下呼吸道感染指累及肺组织或喉以下的气管支气管的感染，常由来自口腔和上呼吸道病毒或细菌等微生物向下呼吸道
蔓延引起，病毒、细菌、真菌等都可引起下呼吸道感染.
病原体pathogens 能引起人或动物感染疾病的微生物.注：包括病毒、细菌、真菌、寄生虫、支原体、衣原体等.[来源：SN/T2028-2015，6.7，有修改]
聚合酶链式反应polymerase chain reaction;PCR
体外扩增DNA的酶促反应过程. [来源：GB/T 39367.1-2020，3.41]
多重聚合酶链式反应multiplexpolymerase chainreaction
3.5
二代测序next-generation sequencing；NGS
又称高通量测序（high-throughput sequencing），能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术，通常一次性产生数千条至数百万条测序片段.
[来源：GB/T 30989-2014，3.19，有修改]
