中华人民共和国国家标准
猪链球菌2型PCR定型检测技术
Method for detection Streptococcus suis type2by PCR
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
中华人民共和国 国家标准猪链球菌2型PCR定型检测技术GB/T 19915 32005出版发行北京西城区复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话： http : / spc net cn2005年12月第一版2005年12月电子版制作书号：155066 ▪ 1-26802：（010）
前言
猪链球菌病是链球菌属中猪源链球菌引致的猪链球菌病的总称，其病原主要有猪链球菌2型和马控制和预防该菌引致的猪链球菌病，建立快速、特异、敏感的检测方法是当务之急.本标准是采用公认 链球菌兽疫亚种.猪链球菌2型可引起猪败血症、脑膜炎等.人可通过伤口感染该菌，并导致死亡，为的细菌学诊断的现代分子生物学技术制定的.
本标准的附录A是规范性附录.
本标准由农业部畜牧兽医局提出.
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口.
本标准起草单位：南京农业大学.
本标准主要起草人：陆承平、范红结、姚火春、何孔旺.
猪链球菌2型PCR定型检测技术
1范围
本标准规定了猪链球菌2型的PCR的定型方法.本标准适用于由猪链球菌2型引致的病死猪分离菌的检测和定型.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准.
3. 1
猪链球菌2型Streptococcus suis type 2
血清型，猪链球菌2型是猪链球菌的一个血清型，不仅对猪致病性很强，面且可以感染特定的人群，是 猪链球菌是属于链球菌属的一种细菌，根据其荚膜多糖抗原的差异，可分为1~34及1/2共35个一种重要的人畜共患病病原菌.
4测定方法
4.1方法提要
挑取可疑细菌培养物菌落加人PCR反应管中，进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，与标准分子量标记比较，确定扩增产物的大小.
4.2试剂和材料
除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682-1992的灭菌双蒸水.4.2.1猪链球菌2型定型PCR反应混合物和猪链球菌2型定型套式PCR反应混合物. 4.2.2Taq DNA聚合酶.4.2.3琼脂糖：电泳级.4.2.4澳化乙锭.4. 2. 6 TE 缓冲液 : 10 mmol/ L Tris-HCI( pH 8. 0) 1 mmol/ L EDTA(pH 8. 0) 4.2.5分子量标记：DL-2000.4. 2. 7 10 × PCR 缓液 :100 mmol/ L KC1 160 mmol/ L(NH );SO 20 mmol/ L MgSO 200 mmol/LTris-HCl( pH 8. 8) 1% TritonX-100 1 mg/mL BSA.4.2.8电泳缓冲液：242 g Tris 碱，57.1 mL冰乙酸，100mL 0.5mol/L EDTA（pH8.0)，加蒸馏水至1000mL，使用时10倍稀释. 4.2.9加样缓冲液：0.25%溴酚蓝，40%蔗糖.4.2.10英膜基因PCR引物和英膜基因套式PCR引物.4.2.11阳性对照和阴性对照.
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