中华人民共和国国家标准
GB 15193.14-2015
食品安全国家标准 致畸试验
中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会 发布
前言
本标准代替GB15193.14-2003（致畸试验》.本标准与GB15193.14-2003相比，主要变化如下： 标准名称修改为"食品安全国家标准致畸试验”；修改了范围；一增加了术语和定义、试验目的、试验报告和解释的内容；增加了动物饲养要求； 增加了动物起始体重的差异应不超过平均体重的20%的要求；修改了试验终止时孕鼠数的要求：一增加了一种建立阳性对照组的方式"用环磷酰胺（15mg/kg体重）于孕第12天腹腔注射1次”；一增加了受试物的给予； 增加了母体动物死亡率不得大于10%的内容：修改了传统致畸试验中给予大鼠受试物的时间：一增加了观察给予受试物期间母体的表现，必要时记录饮水量；一增加了对好娠母体进行肉眼检查； 修改了表2：-删除了表格“致畸试验记录内容”，增加了需要整理的数据内容：统计项目中增加了净增重和性别比，删除了卵巢重量统计；一增加了试验报告应列出的内容和信息.
食品安全国家标准
致畸试验
1范围
本标准规定了动物致畸试验的试验方法和技术要求.本标准适用于评价受试物的致畸作用.
2术语和定义
2.1发育毒性
现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡. 个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害作用表
2.2致畸性
受试物在器官发生期间引起子代永久性结构异常的性质.
2.3母体毒性
受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡.
3试验目的和原理
母体在孕期受到可通过胎盘屏障的某种有害物质作用，影响胚胎的器官分化与发育，导致结构异常，出现胎仔畸形.因此，在受孕动物的胚胎的器官形成期给予受试物，可检出该物质对胎仔的致畸作用.
检测妊娠动物接触受试物后引起的致畸可能性，预测其对人体可能的致畸性.
4仪器和试剂
4.1仪器与器材
实验室常用设备、生物显微镜、体视显微镜、游标卡尺、分析天平.
4.2试剂
4.2.1主要试剂
甲醛、冰乙酸、2，4，6-三硝基酚、氢氧化钾、甘油、水合氯醛、茜素红.
4.2.2主要试剂配制方法
4.2.2.1茜素红贮备液
以50%乙酸为溶剂的茜素红饱和液5.0mL、甘油10.0mL、1%水合氯醛60.0mL混合，存于棕色瓶中.
4.2.2.2茜素红应用液
4.2.2.3茜素红溶液
茜素红0.1g，氢氧化钾10g，蒸馏水1000mL，临用时配制（剥皮法骨骼染色液）.
4.2.2.4透明液A
甘油200mL、氢氧化钾10g，蒸馏水790mL混合.
4.2.2.5透明液B
甘油与蒸馏水等体积混合.
4.2.2.6固定液（Bouins液）
2.4，6-三硝基酚（苦味酸饱和液）75份、40%甲醛20份、冰乙酸5份.
5试验方法
5.1受试物
受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理.
5.2实验动物
5.2.1种、系选择
实验动物的选择应符合GB14922.2和有关规定.喝齿类首选大鼠，非啮齿类首选家兔.若选用其他物种应给出理由.选用健康、性成熟的雄性动物和未经交配的雌性动物，试验开始时动物体重的差异不应超过平均体重的土20%.所用动物应注明种类、品系、性别、体重和周龄.
5.2.2动物性别和数量
性成熟雄性和雌性动物通常按1：1或1：2比例合笼交配，如果5d内未交配，应更换雄鼠.为了怀孕动物数不少于12只. 获得足够的胎仔来评价其致畸作用，大鼠每个剂量水平的怀孕动物数不少于16只，家兔每个剂量水平
5.2.3动物准备
试验前动物在实验动物房至少应进行3d~5d环境适应和检疫观察.
5.2.4动物饲养
实验动物饲养条件、饮用水、饲料应分别符合GB14925、GB5749、GB14924.3和有关规定.试验
期间动物自由饮水和摄食，妊娠动物应单笼饲养.
5.3剂量
必要时设阳性对照组，常用经口给予的阳性对照物及参考剂量为敌枯双（0.5mg/kg体重~1.0mg/kg 试验至少设3个剂量组，同时设溶媒对照组，溶媒对照组除不给受试物外，其余处理均同剂量组.体重）、五氯酚钠（30mg/kg体重）、阿斯匹林（250mg/kg体重~300mg/kg体重）及维生素A（7500pg/kg体重~13000μg/kg体重视黄醇当量）等，或者用环磷酰胺（15mg/kg体重）于孕第12天腹腔注射1次.曾用阳性物开展过致畸试验、并在所用实验动物种系有阳性结果发现，试验可略去设置阳性对照组.
死亡或严重疾病，如果母体动物有死亡发生，应不超过母体动物数量的10%.低剂量组不应出现任何 高剂量组原则上应使部分动物出现某些发育毒性和（或）母体毒性，如体重轻度减轻等，但不至引起观察到的母体毒性或发育毒性作用.建议递减剂量系列的组间距2倍～4倍比较合适.当组间差距较大时（如超过10倍）加设一个试验组.
试验剂量的设计参考急性毒性试验剂量、28天经口毒性试验、90天经口毒性试验剂量和人体实际摄人量进行.对于能求出LD的受试物，根据LD值和剂量-反应关系曲线斜率设计高剂量组的剂量.对于求不出LD的受试物如果28天或90天经口毒性试验未观察到有害作用，以最大未观察到有害作用剂量作为高剂量；如果28d或90d经口试验观察到有害作用，以最小观察到有害作用剂量（LOA- EL）为高剂量组，以下设2个剂量组.设置剂量水平时还应参考受试物的其他毒理学资料.
5.4试验步骤和观察指标
5.4.1“受孕动物”的检查
对于大鼠，雌、雄性动物同笼后，每日早晨对雌鼠检查阴栓或进行阴道涂片检查是否有精子，查出阴栓或精子，认为该动物已交配，当日作为“受孕”零天.对于家免，雌兔和雄免合笼后阴道涂片检查到精子当日作为“受孕”零天.将检出的"受孕动物”随机分到各组，并称重和编号.
5.4.2受试物的给予
受试物通常经口灌胃给予，若选用其他途径应说明理由.通常，在器官形成期给予受试物，（大鼠孕期的第6天～第15天，兔孕期的第6天～第18天）.受试物灌胃给予时，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中，首选溶媒为水、不溶于水的受试物可使用植物油（如橄榄油、玉米油等），不溶于水或油的受试物亦可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混悬液或糊状物等.受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外.应每日在同一时间灌胃1次，根据母体体重调整灌胃体积，胃体积一般不 超过10mL/kg体重，如为水溶液时，最大灌胃体积可达20mL/kg体重；如为油性液体，灌胃体积应不超过4mL/kg体重：各组潍胃体积一致.
5.4.3母体观察
每日对动物进行临床观察，包括皮肤、被毛、眼睛、黏膜、呼吸、神经行为、四肢活动等情况，及时记录各种中毒体征，包括发生时间、表现程度和持续时间，发现虚弱或濒死的动物应进行隔离或处死，母体有 流产或早产征兆时应及时副检.
在受孕第0天、给予受试物第1天、给予受试物期间每3天及处死当日称母体体重.若通过饮水途径给予受试物，还应记录饮水量.
