中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准 水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯 雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌 二醇、雌三醇残留量的测定 气相色谱-质谱法
National food safety standard-
Determination of octylphenol nonylphenol bisphenolA diethylstilbestrol estrone 17a-ethinylestradiol 17β-estradioland estriol residues in fishery products
bygas chromatographymass spectrometry
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
前言
本标准系首次发布.
食品安全国家标准
水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的测定气相色谱-质谱法
1范围
本标准规定了水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法.
本标准适用于鱼、虾、蟹、贝类、海参、鳖等水产品可食组织中辛基酚、壬基酚、双酚A、己烯雎酚、雌酮、17a-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的检测.
2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17a-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留经乙酸乙酯提取，凝胶渗透色谱及固相萃取净化，七氟丁酸酐衍生，气相色谱-质谱法测定，外标法定量.
4试剂与材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙酸乙酯（CHCOOCH）：色谱纯.4.1.2丙酮（CHCOCH）：色谱纯.4.1.3正已烷（CgH4）：色谱纯.4.1.4甲醇（CHOH）：色谱纯.4.1.5环已烷（CH）：色谱纯.4.1.6七氟丁酸酐（CgFuO）.4.1.7碳酸钠（NaCOg）.
4.2溶液制备
4.2.1碳酸钠溶液：称取碳酸钠10g，用水溶解并稀释至100mL，混匀.
4.2.250%环已烷乙酸乙酯溶液：环已烷与乙酸乙酯等体积混合.4.2.350%甲醇水溶液：甲醇与水等体积混合.
4.3标准品
辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17a-乙炔雎二醇、17β-雌二醇、雌三醇含量均≥98.0%，详见附录A.
4.4标准溶液制备
4.4.1标准贮备液：取辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17a-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇标准品各约10mg，精密称定，于10mL棕色量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻 度，配成浓度为1mg/mL的标准储备溶液.-18℃以下保存，有效期6个月.
50μg/L，壬基酚、双酚A30μg/L，已烯雌酚50μg/L，雎酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、 4.4.2混合标准工作液：分别精密量取标准储备液适量，用甲醇稀释，配成浓度为：辛基酚雌三醇100μg/L的混合标准工作液.2～8℃避光保存，有效期1周.
4.5材料
4.5.1聚苯乙烯凝胶填料：Bio-BeadsS-X3，200~400目.
4.5.2HLB固相萃取柱：60mg/3mL，或相当者.
4.5.3凝胶净化柱：长25cm，内径2cm，具活塞玻璃层析柱.将50%环已烷乙酸乙酯溶液浸泡过夜的聚苯乙烯凝胶填料以湿法装入柱中，柱床高20cm.柱床始终保持在50%环已烷 乙酸乙酯溶液中.
5仪器和设备
5.1气相色谱质谱联用仪：配EI源.5.3均质机.5.5涡旋混合器.5.6氮吹仪.5.7固相萃取装置.5.8聚丙烯离心管：50mL.5.9具塞玻璃离心管：10mL.5.10梨形瓶：100mL.6试料的制备与保存6.1试料的制备
5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g.
5.4离心机：4000r/min.
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质.
取均质后的供试样品，作为供试试料.一取均质后的空白样品，作为空白试料.一取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料.
6.2试料的保存
-18℃以下保存.
7测定步骤
7.1提取
取试料5g（准确至土20mg），于50mL离心管，加碳酸钠溶液3mL，乙酸乙酯20mL，漩涡混匀，超声提取10min，4000r/min离心10min，取上清液至100mL梨形瓶中.残渣用 乙酸乙酯10mL重复提取一次，合并上清液，于40℃旋转蒸发至干，用50%环已烷乙酸乙酯溶液5mL溶解残留物，备用.
7.2净化
7.2.1凝胶净化
将备用液转至凝胶净化柱上，用50%环已烷乙酸乙酯溶液110mL淋洗，根据凝胶净化洗脱曲线确定收集淋洗液的体积，40C旋转蒸干，残渣用甲醇1mL溶解，加水9mL稀释，备用.
凝胶净化柱洗脱曲线的绘制：将5mL混合标准溶液上柱，用50%环已烷乙酸乙酯溶液淋洗，收集淋洗液，每10mL收集一管，于40C水浴中氮吹至干.按7.3的方法衍生，气相色谱-质谱法测定，根据淋洗体积与回收率的关系确定需要收集的淋洗液体积.
7.2.2固相萃取净化
固相萃取柱依次用甲醇5mL、水5mL活化，取备用液过柱，控制流速不超过2mL/min，用50%甲醇水溶液10mL淋洗，抽干，用甲醇10mL洗脱，控制流速不超过2mL/min.收集洗脱液于10mL具塞玻璃离心管中，于40C水浴中氮气吹干.
7.3衍生
于30℃恒温箱中衍生30min，氮气吹干，精密加入正已烷0.5mL，旋涡混合10s，溶解残余 于上述具塞玻璃离心管中加入七氟丁酸酐30L、丙酮70L，盖紧盖，涡混合30s，物，供GC-MS分析.
7.4标准曲线的制备
取混合标准工作溶液50gL、100gL、200pL、500pL、1000pL于1.5mL样品反应瓶中，40C水浴中氮吹至干，按7.3方法衍生，制成辛基酚、已烯雌酚浓度均为5pg/L、10g/L、25
