中华人民共和国国家标准
GB 31660.9-2019
食品安全国家标准 家禽可食性组织中乙氧酰胺苯甲酯残留量 的测定高效液相色谱法
Nationalfood safety standard-Determination of ethopabate residues in edible tissue of poutry byhigh performance liquid chromatography
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
前言
本标准系首次发布.
食品安全国家标准
家禽可食性组织中乙氧酰胺苯甲酯残留量的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了家禽可食性组织中乙氧酰胺苯甲酯残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法.
本标准适用于家禽肌肉、肝脏、肾脏组织中乙氧酰胺苯甲酯残留量的检测.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括的修改单)适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中残留的乙氧酰胺苯甲酯用乙晴提取,正已烷脱脂,无水硫酸钠脱水,浓缩,正己烷-丙酮溶解残余物,固相萃取柱净化,甲醇洗脱,高效液相色谱测定,外标法定量.
4试剂与材料
除另有规定外,试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙晴(CHCN):色谱纯.4.1.2甲醇(CHOH):色谱纯.4.1.3正已烷(CgH).4.1.4丙酮(CHCOCH).4.1.5无水硫酸钠(NaSO).
4.2标准品
乙氧酰胺苯甲酯(Ethopabate CHsON.CAS号:59-06-3):含量≥98.5%.
4.3标准溶液的制备
标准储备液:取乙氧酰胺苯甲酯标准品约10mg,精密称定,于100mL量瓶中,加甲醇适量使溶解并稀释至刻度,摇匀.4C保存,有效期1周.
4.4材料
硅酸镁固相萃取柱:100mg/mL,或相当者.
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪:配紫外检测器.5.2分析天平:感量0.00001g和0.01g.5.5旋转蒸发仪.
5.3匀浆机.
5.4离心机:4000r/min.
5.6旋涡混合器:3000r/min..
5.7振荡器.
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.取均质后的供试样品,作为供试试料.取均质后的空白样品,作为空白试料.
取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
6.2试料的保存
-20C储存备用.
7测定步骤
7.1提取
称取试样5g(准确至±20mg),置50mL具塞离心管中,加乙晴15mL,无水硫酸钠10g,正已烷10mL,涡旋混合1min,振荡5min,4000r/min离心10min.取下层乙于鸡心瓶中备用.沉淀中再加入乙晴15mL,重新提取一次,合并两次乙提取液于同一鸡心瓶中,45℃旋转蒸发至近干.加正已烷-丙酮(9:1)5.0ml使溶解,超声30s,摇匀,转移至10mL离心 管,4000r/min离心10min,上清液备用.
7.2净化
硅酸镁固相萃取柱用甲醇5mL预洗.取上述上清液1.0mL过柱,用正已烷3mL淋洗,挤干.用甲醇1.0mL洗脱,挤干,收集洗脱液,过0.45μm有机滤膜,供高效液相色谱测定.
7.3标准曲线的制备
分别精密量取标准储备液适量,用甲醇稀释成浓度分别为5.0、2.5、1.0、0.5、0.25、0.10、0.05μg/mL的标准溶液,供高效液相色谱仪测定.临用前配制.
7.4测定
7.4.1液相色谱参考条件
a)色谱柱:Cs柱(250mm×4.6mm,5um),或相当者.b)流动相:乙晴-水(30:70).c)流速:1.0mL/min.d)检测波长:270 nm.e)进样量:10gL.
7.4.2测定法
取试样溶液和相应浓度的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法以峰面积计算.标准溶液和试样溶液中乙氧酰胺苯甲酯的响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述色谱条件下,标准溶液色谱图见附录A.
7.5空白试验
除不加试样外,采用完全相同的测定步骤进行测定.
8结果计算和表述
试样中乙氧酰胺苯甲酯的残留量按(1)计算:
式中:
X一试样中乙氧酰胺苯甲酯的残留量,单位为微克每千克(μg/kg):Cs一标准溶液中乙氧酰胺苯甲酯的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL):
A-试样溶液中乙氧酰胺苯甲酯的峰面积:As一标准溶液中乙氧酰胺苯甲酯的峰面积:V1一试样提取液浓缩近干后残余物溶解的总体积,单位为毫升(mL):V2一过硅酸镁固相萃取柱所用备用液体积,单位为毫升(mL):V;一洗脱液体积,单位为毫升(mL):