中华人民共和国国家标准
GB 4789.40-2016
食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局 发布
前言
SN/T1632.1-2013（出口奶粉中阪崎肠杆菌（克罗诺杆菌属）检验方法第1部分：分离与计数》.
本标准与GB4789.40-2010相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属（阪崎肠杆修改了可疑菌落的挑取数量. 菌）检验”：
食品安全国家标准
克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验 食品微生物学检验
1范围
本标准规定了食品中克罗诺杆菌属（Cronobacter）的检验方法.本标准适用于要幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中克罗诺杆菌属的检验.
2设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1C，44℃±0.5℃2.2冰箱：2C~5℃ 2.3恒温水浴箱：44C土0.5C.2.4天平：感量0.1g.2.5均质器.2.7无菌吸管：1mL（具0.01ml刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头. 2.6振荡器.2.8无菌锥形瓶：容量100mL、200mL、2000ml.2.9无菌培养Ⅲ：直径90mm.2.10pH计或pH比色管或精密pH试纸.2.11全自动微生物生化鉴定系统.
3培养基和试剂
3.1缓冲蛋白陈水(buffer peptone water，BPW）：见A.1.3.2改良月桂基硫酸盐胰蛋白陈肉汤-万古霉素（modified lauryl sulfate tryptose broth-vanycinmedium mLST-Vm) :见 A.2. 3.3阪崎肠杆菌显色培养基.3.4胰蛋白陈大豆琼脂（trypticase soy agar TSA）：见A.3.3.5生化鉴定试剂盒.3.6氧化酶试剂：见A.4.3.81-鸟氨酸脱羧酶培养基：见A.6. 3.7L-赖氨酸脱羧酶培养基：见A.5.3.9L-精氨酸双水解酶培养基：见A.7.3.10糖类发酵培养基：见A.8.3.11西蒙氏柠檬酸盐培养基：见A.9.
第一法克罗诺杆菌属定性检验
4检验程序
克罗诺杆菌属检验程序见图1.
图1克罗诺杆菌属检验程序
5操作步骤
5.1前增菌和增菌
动至充分溶解，36C±1C培养18h±2h.移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤，44C士0.5℃ 取检样100g（mL）置灭菌锥形瓶中，加人900mL已预热至44℃的缓冲蛋白陈水，用手缓缓地摇培养24h±2 h.
5.2分离
5.2.1轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色 培养基平板，显色培养基须符合GB4789.28的要求，36C士1℃培养24h士2h，或按培养基要求条件
培养.
5.2.2挑取至少5个可疑菌落，不足5个时挑取全部可疑菌落，划线接种于TSA平板.25C士1C培 养48 h±4 h.
5.3鉴定
自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定.克罗诺杆菌属的主要生化特征见表1，可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统.
表1克罗诺杆菌属的主要生化特征
生化试验 特黄色素产生 氧化酶L-顿氨酸脱玻酶1-乌氨酸脱竣静 ()L-精氨酸双水解酶 柠檬酸水解 D-山梨醇 () ()L-鼠李糖 发 D-蔗糖 D-蜜二糖 苦杏仁式 注：>99 %阳性; >99 %阴性;()90%~99%阳性;(-)90%~99%阴性
6结果与报告
综合菌落形态和生化特征，报告每100g（mL）样品中检出或未检出克罗诺杆菌属.
第二法克罗诺杆菌属的计数
7操作步骤
7.1样品的稀释
7.1.1固体和半固体样品：无菌称取样品100g、10g、1g各三份，分别加人900mL、90mL、9mL已预热至44C的BPW，轻轻振摇使充分溶解，制成1：10样品匀液，置36C土1℃培养18h土2h.分别移取1 mL转种于 10 mLmLST-Vm肉汤，44 C±0.5C培养 24 h±2 h.
7.1.2液体样品：以无菌吸管分别取样品100mL、10mL、1mL各三份，分别加人900mL、90mL、 9mL已预热至44C的BPW，轻轻振摇使充分混匀，制成1：10样品匀液，置36C士1C培养18h士2 h.分别移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤，44℃C±0.5C培养24h±2h.
