中华人民共和国粮食行业标准
LS/T6122-2017
粮油检验粮油及制品中黄曲霉毒素含量 测定柱后光化学衍生高效液相色谱法
Inspection of grain and oils-Determination aflatoxin content in grains and oilsCleanup by immunoaffinity chromatography and determination by high-performanceliquid chromatography and post-column photochemical derivatization
国家粮食局发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAT/TC270）归口. 本标准由国家粮食局提出.本标准起草单位：国家粮食局科学研究院、北京市粮油食品检验所、湖北省粮油食品质量监测站、北京中检维康技术有限公司、北京农业质量标准与检测技术研究中心.
本标准主要起草人：王松雪、王雄、琴、熊宁、谢刚、黎睿、张艳、张荔、周明慧、陆安祥.
粮油检验粮油及制品中黄曲霉毒素含量 测定柱后光化学衍生高效液相色谱法
1范围
试剂和材料、仪器和设备、扦样、试样制备、操作步骤、结果计算和精密度. 本标准规定了柱后光化学衍生高效液相色谱法测定粮食和食用植物油中黄曲霉毒素含量的原理、
本标准适用于粮油及制品中黄曲霉毒素含量的测定（油料除外）.
本标准中黄曲霉毒素B、B、G、G;的定量检测限分别为0.5μg/kg、0.25μg/kg、1.0μg/kg和0.5μg/kg.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T5524动植物油脂扦样GB/T6582分析实验室用水规格和试验方法GB/T15687动植物油脂试样的制备
3原理
试样由甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释和免疫亲和层析柱净化后，用高效液相色谱进行分离，利用色谱柱后的光化学衍生器使分离物发生衍生反应，产生荧光信号，通过荧光检测器测定荧光强度，采用标准曲线法计算样品中黄曲霉毒素的含量.
4试剂和材料
除另有说明外，试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682中一级水的规定.
4.7黄曲霉毒素标准储备溶液：准确称取适量黄曲霉毒素标准品（4.6）.用乙睛（4.1）或甲醇（4.2）分别配制2μg/mL的黄曲霉毒素B、B、G、G：标准储备液，保存于4C备用，有效期3个月.
注：考虑到黄曲霉毒素具有致癌性，用粉末配制标准储备液在安全以及量值保障方面有很多不确定因素，建议直接购买商品化的黄曲霉毒素标准溶液.
LS/T 6122-2017
甲醇乙晴水（4.5）定容为混合标准工作液.系列混合标准工作液中B浓度分别为0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L，B、G、G;浓度以B浓度为基础，按414：1（BBGG）比例配制.
5仪器和设备
5.2容量瓶：2mL.
5.3玻璃注射器：20mL.
5.4微量注射器：100uL
7试样制备
用粉碎机（5.7粉碎各物类样品使其全部通过20目样品筛（5.6），混匀 表人洁净容器内作为试样，密封备用.
植物油试样制备依据GB/T15687执行.取样前充分混合样 为固体样品需完全熔化，以保证充分混合.
8操作步骤
8.1提取
谷物类样品：称取25g试样（精确至0.1g）于1000mL均质杯（5.8）中，加人5g氯化钠（4.3）及125.0mL（V）甲醇水（73）（4.4），以均质器高速搅提取2min.定量滤纸过滤，移取15.0mL（V）滤液并加人30mL（V）水稀释，用玻璃纤维滤纸（5.1）过滤1次～2次，至滤液澄清，备用.
植物油样品：称取5.0g试样（精确至0.01g）于50mL离心管，加1.0g氧化钠（4.3）及25.0mL（V）甲醇水（73）（4.4）.涡荒均匀后，以35r/min振荡30min，在7000r/min转速下离心5min. 吸取并弃去油层后过滤提取液，取15mL滤液（V），加30mL（V）水稀释混匀，用玻璃纤维滤纸（5.1）过滤1次～2次，至滤液澄清，备用.
8.2净化
将免疫亲和柱（5.5）连接于20mL注射器（5.3）下端.移取15.0mL（V）样品提取液（相当于1.0g样品）注人注射器（5.3）中，将空气压力泵（5.9）与注射器（5.3）上端连接，调节压力使溶液以约6mL/ min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至液体全部流出，有空气通过.以水淋洗柱子2次，每次10.0mL，弃去全部流出液，直至空气通过柱体.加人1.0mL甲醇（4.2）洗脱，流速为1mL/min~2mL/min，收集全部洗脱液于2.0mL容量瓶（5.2）中，用水稀释至刻度（V）.混匀后供色谱测定.
8.3测定
8.3.1高效液相色谱参考条件
高效液相色谱参考条件
8.3.2标准白线制作
上述色错条件下，基线半整后制作工作标准曲线.
分别吸取不同浓度标准混合落液8）20WL进样分析，以黄曲商市素B，B、G、的色谱峰峰面积对相应标准工作溶液浓度作图年别封作黄曲等毒素B、B56的工作标准曲线. 黄曲霉毒素B、B、G、G标准品的高效液相色带图参见附求本
8.3.3试样分析
取20μL试样溶液（2）进行液相色谱测定，外标法定量.
8.3.4空白试验
9结果计算
9.1黄曲霉毒素各组分含量
按式（1）计算试样中黄曲霉毒素各组分（B、B、G或G）的含量（μg/kg），式（1）中W按式（2）计算.
式中：
X试样中某一黄曲霉毒素（B、B、G、G）的含量，单位为微克每千克（pμg/kg）； c-进样溶液中某一黄曲霉毒素（B、B、G、G）的含量，单位为微克每升（μg/L）；空白试验进样溶液某一黄曲霉毒素（B、B、G、G）的含量，单位为微克每升（μg/L）；Co
