NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T3109-2017
植物油脂中辣椒素的测定 免疫分析法
Determination of capsaicinoidinvegetableoil products-Immunoassay
中华人民共和国农业部 发布
前言
本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料产品质量安全风险评估实验室（武 本标准由农业部种植业管理司提出并归口.汉）、农业部油料及制品质量监督检验测试中心.本标准主要起草人：李培武、张兆威、王督、张奇、马飞、张文、张良晓、唐晓倩、喻理.
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
植物油脂中辣椒素的测定 免疫分析法
1范围
本标准规定了植物油脂中辣椒素的测定方法.
本标准适用于植物油脂中辣椒素的测定.
本标准第一法为时间分辨荧光免疫层析法，定量检出限为0.50pg/kg.
本标准第二法为酶联免疫吸附法，定量检出限为0.30pg/kg.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件中 注日期 日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引 新 有的修
3原理
AL测线上辣椒素 试样中辣根 6 蛋自偶联物的免疫反应，使检测或时间分旗茨光强度 胶标记的 异性抗体发生结合局 层析过程 与硝酸纤维素膜检 过检测时间分辨荧光强度变化进 行产量ULT
4试剂
4.7销标记辣椒索抗体溶液.
4.8辣椒素标准液：准确称取辣椒素2.5mg于25ml.容量瓶中，甲醇定容，配置成100gg/L.的溶液.-20℃保存7d，备用.
5仪器设备与材料
5.1时间分辨荧光检测仪：激发波长（365土5）nm，检测波长（615土5）nm.
5.2辣椒素时间分辨荧光免疫层析装置：固定有辣椒素一牛血清白蛋白偶联物，用于样品中辣椒素与销标记抗体预反应后再与辣椒素一牛血清白蛋白偶联物反应的载体（见图1）.
图1辣椒素时间分辨荧光免疫层析装置示意图
5.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片.5.2.3硝酸纤维索膜：4cm毛细时间不小于135s.5.2.4吸水纸，5.2.5底板.5.2.6连接胶带.5.3均质机，转速大于等于20000r/min. 5.4分析天平：感量0.1g.5.5恒温装置：温控范围为（37.0±2.0）℃5.6涡旋振荡器.5.7微量移液器：10gl~200gul 100pl~1000μl.5.8量筒：10ml5.9样品瓶：1.5mL，取150uL销标记辣椒素抗体溶液，冻干.5.10滤膜：0.45um2
5.2.1辣椒素一牛血清白蛋白偶联率为1：5~1：20（牛血清白蛋白：辣椒素）.
5.11容量瓶：25ml.
6分析步骤
6.1样品与空白基质溶液制备
6.1.1试样制备
称取植物油脂20.0g.加人10.0mL.甲醇（4.2）.用均质机均质提取5min后，静置分层，收集甲醇层，将植物油脂层重新加人10.0mL甲醇（4.2），使用均质机提取5min后，静置分层，收集甲醇层；将2次甲醇层萃取液合并，取10.0ml.萃取液氮吹至近干，加人200gl.甲醇（4.2）复溶.加人800gl.稀释液 （4.6），经0.45m滤膜过滤，得到试样制备液，备用.
6.1.2空白基质溶液制备
取经免疫亲和液相色谱或免疫亲和液质联用法确定的阴性样品，按6.1.1制备空白基质溶液，备用.
6.2取150gL试样制备液（6.1.1），垂直滴加于样品瓶（5.9）内，涡旋混合5s.取出辣椒素时间分辨6 min 荧光免疫层析装置（5.2），按箭头方向插人加样后的样品瓶中，将样品瓶置于恒温装置中，37C反应
6.3取出辣椒素时间分辨荧光免疫层析装置，上机（5.1）检测.
6.4标准曲线
将辣椒素标准液（4.8）用空白基质溶液（6.1.2）配制为100.0gg/L、50.0μg/L、25.0μg/L、12.5μg/L、6.2μg/L、3.1μg/L、1.6pg/L、0.8pg/L、0.4μg/L的系列标准工作液，按6.2和6.3的规定进行检测，根据检测线T信号值与质控线C信号值的比值（T/C）和标准溶液浓度的自然对数值（lnc） 建立标准曲线.
7结果计算
试样中辣椒素含量以质量分数X计，单位为微克每千克（μg/kg），按式（1）计算.
式中：
-从标准曲线上查得的测定液中辣椒素含量，单位为微克每升（ug/L)；
”-试样稀释倍数： V一样品测定液体积，单位为毫升（mL）：m；-试样质量，单位为克（g).
计算结果保留3位有效数字.
8精密度
8.1重复性
在重复性条件下，辣椒素含量不大于10.0pg/kg时，2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%；辣椒素含量大于10.0pg/kg时，2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%.
8.2再现性
在再现性条件下，辣椒素含量不大于10.0pg/kg时，2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%；辣椒素含量大于10.0ug/kg时，2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%.
