NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T3290-2018
水果、蔬菜及其制品中酚酸含量的测定 液质联用法
Determination of phenolic acid in fruits vegetables and derived productsLC-MS-MSmethod
中华人民共和国农业农村部发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由农业农村部种植业管理司提出.
本标准由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC510）归口.
城）、北京农业质量标准与检测技术研究中心. 本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所、农业农村部果品及苗木质量监督检验测试中心（兴
本标准主要起草人：聂继云、李静、冯晓元、王蒙、闫震、高媛、李志霞、李海飞、匡立学、王瑶.
水果、蔬菜及其制品中酚酸含量的测定 液质联用法
1范围
本标准适用于水果、蔬菜及其制品中14种主要酚酸的含量测定本标准的方法检出限和定量限见附录A
本标准规定了水果、蔬菜及其制品中酚酸含量的液质联用测定方法.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用 凡是注日期的 为版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件、 （括 改单
3原理
结合型酚酸，经固相萃取不柱 水果、蔬菜及其制品中的 酸经甲配 型酚酸和R 净化，超高 谱检测 量
4试剂和材料
4.1试剂
4.1.6提取剂：甲醇十水十 =80 1.3）、200mL水和0.5mL盐酸（4.1.1），混匀.
4.1.74mol/L氢氧化钠溶液：称取160 0g氢氧化钠（4.1.5），用水溶 容至1000ml
14种酚酸标准品：纯度≥98%，相关信息见附录A.
4.3标准溶液配制
4.3.1酚酸标准储备液：称取酚酸标准品10.00mg.用甲醇（4.1.3）溶解并定容至10mL，配制成1mg/mL的各酚酸标准储备液，在一20C保存，可使用12个月.
4.3.2酚酸混合标准溶液：根据需要，准确吸取一定量的各酚酸标准储备液，用甲醇（4.1.3）稀释成适当浓度的混合标准溶液，现用现配.
4.4材料
4.4.1有机相微孔滤膜：0.22um
4.4.2固相萃取小柱；OasisHLB固相萃取小柱，200mg，6mL，或性能相当者.
NY/T3290-2018
5仪器
5.1液相色谱仪：配有三重四级杆质谱检测器.5.2电子天平：感量为0.01g和0.0001g.5.3离心机：可达到9000r/min以上. 5.4振荡器：带有温度控制.5.5超声波清洗器.5.6旋转蒸发仪：带有温度控制.
6试样的制备
氮冷冻，研磨成粉末，备用.液体果蔬制品直接混匀备用. 水果、蔬菜及其固体制品按GB/T8855的规定取样，四分法取约250g，将可食部分切碎，立即用液
7分析步骤
7.1提取
9000r/min离心5min，上清液转人50mL棕色容量瓶中，残渣再用约10mL提取剂（4.1.6）按上述步 称取10.00g试样于50mL棕色离心管中，加人30mL提取剂（4.1.6），混匀，室温下超声20min，骤重复提取一次，合并两次提取液，用提取剂（4.1.6）定容至50mL用于游离型酚酸和游离酯型酚酸的制备，残渣用于结合型酚酸的制备.
7.2耐酸的制备
7.2.1游离型酚酸的制备
溶剂，浓缩至近干，加人2mL水，摇匀，备用，即为溶液A.将固相萃取小柱（4.4.2）依次用约5mL甲 吸取10.00mL样品提取液（7.1）于100mL旋转蒸发瓶中，40℃下减压蒸发除去提取液中的有机醇（4.1.3）和约5mL水预淋洗、活化，将溶液A加到固相萃取小柱中，缓慢抽滤，滤液需呈滴状，弃去滤液，用2mL水清洗旋转蒸发瓶，转人固相萃取小柱中，抽滤，弃去滤液，用约5mL甲醇（4.1.3）分两次待测. 清洗旋转蒸发瓶，加人到固相萃取小柱中，收集滤液，用甲醇（4.1.3）定容至5mL，混匀，过滤膜（4.4.1）
7.2.2游离酯型酚酸的制备
吸取10.00mL样品提取液（7.1）于100mL旋转蒸发瓶中，40℃下减压蒸发除去提取液中的有机溶剂，浓缩至近干，用10mL4mol/L氢氧化钠溶液（4.1.7）分三次清洗旋蒸瓶，清洗液合并到50mL棕色离心管，40℃避光振荡水解2h，用盐酸（4.1.1）调节pH至2，混匀，备用，即为溶液B.将固相萃取小柱（4.4.2）依次用约5mL甲醇（4.1.3）和约5mL水预淋洗、活化，将溶液B加到固相萃取小柱中，抽 滤，弃去滤液，用约5mL甲醇（4.1.3）分两次清洗离心管，加人到固相萃取小柱中，收集滤液，用甲醇（4.1.3）定容至5mL，混匀.过滤膜（4.4.1）待测.
7.2.3结合酯型耐酸的制备
残渣（7.1）用30mL提取剂（4.1.6）分两次清洗后，用20mL4mol/L氢氧化钠溶液（4.1.7）清洗到50mL棕色离心管中，40C避光振荡水解2h.离心吸取10mL.用盐酸（4.1.1）调节pH至2为溶液C. 将固相萃取小柱（4.4.2）依次用约5mL甲醇（4.1.3）和约5mL水预淋洗、活化，将溶液C加至固相萃取小柱中，抽滤，弃去滤液，用约5mL甲醇（4.1.3）分2次清洗固相萃取小柱，加人到固相萃取小柱中，收集滤液，用甲醇（4.1.3）定容至5mL，混匀，过滤膜（4.4.1）待测.
7.3试剂空白试验
除不加人样品外，其他过程与样品处理相同.
7.4测定
7.4.1液相色谱-串联质谱参考条件
色谱柱：WatersHSST3色谱柱，柱长150mm，内径2.1mm，颗粒度1.8um，连接同款保护柱或性能类似的色谱柱.
流速：0.3mL/min.
流动相：A相为0.1%甲酸，B相为乙晴（含0.1%甲酸），流动相梯度洗脱程序见表1.
表1流动相梯度洗脱程序
7.4.2定性测定
在相同试验条件 E 普峰的保留时间与标湘 ，并且扣除背景后的样品质谱图中， 现 所选的 度比与标准样品的 相一致（表2），则可判断为该成分.试剂 各目标化合物的多反应监测 (7.3) M）色谱 自不能橙出 对被 分有干扰的物质.
质请选择离子丰度允许偏差
单位为百分率
相对丰度 >50 >20~50 >10~20 10允许偏差 20 <±25 ≤土30 7.4.3定量测定 标准采用外标-校准曲线法定量测定.保证所测样品中组分的响应值均在仪器的线性范围内. 8结果计算 样品中待测组分的含量以质量分数计，以毫克每干克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）表示，按式（1）计算.
