OB
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5165-2017
食品用乳酸菌鉴定技术指南
Guidelineforidentification oflactic acidbacteriainfood
中华人民共和国工业和信息化部发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.本标准由中国轻工业联合会提出.本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院、上海交大昂立股份有限公司、中粮营养健康研究院有 本标准由全国食品发酵标准化中心归口.限公司.本标准主要起草人：孟镇、杭晓敏、钟其顶、丁庆波、张是、张蔚、陈历水、杨彤辉.
本标准为首次发布.
引言
国际乳品协会（IntemationalDairyFederation，IDF）2012年发布455号公告《发酵食品中微生物菌种安全性论证）（Safety Demonstrationof MicrobialFoodCultures inFermented FoodProducts），公布了菌株和模式菌种在表型和/或基因型具有高度的相似性时，被归为同一种. 食品用微生物菌种，其中包括细菌195种，在确定细菌分类学地位时，建议采用多相鉴定的方法，即当
2010年原卫生部办公厅印发了可用于食品的菌种名单，包括双歧杆菌属（Bifidobacterium）、乳杆菌属（Lactobacilhus）和链球菌属（Streptococcus）三个属，本指南根据国际相关组织公布的技术文件中乳酸菌鉴定的指导原则，给出可用于食品的双歧杆菌属、乳杆菌属和嗜热链球菌等乳酸菌的鉴定原则.
食品用乳酸菌鉴定技术指南
1范围
本标准规定了可用于食品的双歧杆菌属（Bijidobacterium）、乳杆菌属（Lactobacillus）和嗜热链球菌（Streptococcus thermophius）鉴定技术的实验室基本要求、生物安全与质量控制、鉴定原则和鉴定结果表述.
本标准适用于可用于食品的双歧杆菌属（Bijfidobacterium）、乳杆菌属（Lactobacillus）和嗜热链球菌（Streptococcus thermophus）的种水平鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总则GB4789.35食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法
3缩略语
下列缩略语适用于本文件.PCR：polymerase chainreaction，聚合酶链式反应.DNA：deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸.EMBL：The europeanmolecular biology laboratory.欧洲分子生物学实验室. Genbank：基因库.DDBJ:：DNA data bank ofjapan，日本DNA数据库.Taq：thermus aquaticu，水生栖热菌.dATP：deoxy-adenosine triphosphate，脱氧腺苷三磷酸. dNTP：deoxy-ribonucleoside triphosphate，脱氧核糖核苷三磷酸.dTTP：deoxy-thymidine triphosphate，脱氧胸苷三磷酸.dCTP：deoxy-cytidinetriphosphate，脱氧胞苷三磷酸.dGTP：deoxy-guanosine triphosphatg，脱氧鸟苷三磷酸.Tris：tris（hydroxymethyl）aminomethane，三（羟甲基）氨基甲烷. EDTA：ethylene diamine tetraacetic acid，Z二胺四乙酸.TE：Tris-HCI、EDTA缓冲液.16s rRNA：16sribosomal ribonucleic acid，16s 核糖体核糖核酸.pheS：phenylalanyl-tRNA synthasealpha subunit，苯丙氨酰-tRNA合成酶a亚基. bp:base pair，碱基对.
4实验室基本要求和生物安全与质量控制
应符合GB4789.1的规定.
QB/T5165-2017
5鉴定原则
5.1 表型试验（形态观察及生理生化方法）
根据乳酸菌菌株的 养形态 主理生化特征等内容， 与分类系统对照，得到销株的分类信息.双歧球菌（Streptococcusthermop 杆菌属（Bijfidobacterum） 可按照GB4789.34规定的方法执行，乳杆菌属（Lacrobacillus）和嗜热链 ）鉴定可按照GB4789.35规定的方法执行
5.2PCR方法
根据目标菌种的特定基因序列设计/选择相应的引物，以提取的乳酸菌基因组DNA为模板进行PCR扩增，对所得的产物进行测序，并将测序得到的DNA序列与国际已有核酸序列数据库（如Genbank、 EMBL、DDBJ等）中已知参考序列进行同源性搜索比对，得到菌株的种/属信息，双歧杆菌属（Bifidobacterium）、乳杆岗属（Lactobacillus）和啦热链球菌（Streptococcusthermophils）的PCR签定方法参见附录A.
6鉴定结果表述
根据菌株的核酸序列、形态特征观察和生理生化特征，对照通用的鉴定系统，确定待鉴定菌株的分类地位.菌种名称来用国际命名规则，使用属名和种加词的拉丁词，并附中文译名，有异名时应同时标注.
