中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 4483-2016
出口活鱼泰妙菌素检测技术规范
Determination protocol of Tiamulin in fishes for export
国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国河北出人境检验检疫局. 本标准主要起草人：易海华、房超、祝长青、赵优、吴萍兰、张阳、杨志俊.
出口活鱼泰妙菌素检测技术规范
1范围
本标准规定了出口活鱼中泰妙菌素残留的高效液相色谱检测技术规范，本标准适用于出口活鱼拳妙菌索残留的检测.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T0376出口水产品检验抽样方法
3试剂和材料
除另有说明外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水
3.2乙晴：色谱纯.3.30.02mol/L磷酸盐缓冲液：取0.2mol/L磷酸氢二钠94.7mL、0.2mol/L磷酸二氢钠5.3mL，加3.40.1%磷酸溶液：准确移取1.0ml.磷酸，加水至1L 水至1L.调节pH至8.0.3.50.1%酒石酸溶液：准确称取0.10g酒石酸，用水溶解并定容至100ml3.6泰妙菌素标准物质：泰妙菌素（分子式：CHNO S；CAS号：55297-95-5），纯度≥99.8%3.7泰妙菌素标准储备溶液（100mg/L）：准确称取10.0mg泰妙菌素标准物质放人100mL容量瓶3.8泰妙菌素标准工作溶液：移取适量标准储备溶液用甲醇：0.1%磷酸溶液（1：9.体积比）配制 中，用甲醇溶解并定容至刻度，一18C避光保存.0.20μg/mL~2.0pg/mL系列标准工作溶液，供液相色谱法测定用，用前配制.3.9OasisHLB周相萃取柱会或相当者：60mg，3mL（或相当者），使用前依次用3mL甲醇、3mL0.1%酒石酸活化，3.10滤膜：0.45pm有机相滤膜.
3.1甲醇：色谱纯，
4仪器
4.2天平：感量0.01g，0.0001g. 4.1高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器.4.5均质器.4.6恒温氮吹设备.
4.3振荡器.
4.4离心机.
SN/T 4483-2016
4.7涡旋混合器，
5样品制备
5.1制样
分成2份.装人洁净的容器密封，并标明标记. 试样按照SN/T0376进行抽样，开膛，去除内脏，取可食部分，全部搅碎后混匀，按四分法分样，均
5.2试样保存
将试样于2C~8℃下避光保存检离样品 不能使用腐烂样品检测.
6测定
6.1提取
称取10g均匀试样（精确到0.01g）于 100mL离心智中，加人10mL磷酸盐缓冲液（pH8.0），均质，加人30mL乙酸乙酯，涡旋混匀1min.以5000/min离心10min，取乙酸乙酯层于100ml鸡心0.1%酒石酸溶液转移至离心管.加人5mL石油醚去脂，涡旋30s.以5000r/min离心5min，弃上层. 瓶中.残渣用20mL乙酸乙酯重复提取一次.合并两次提取液，4℃旋转蒸发至近干.加入2mL用5ml石油醚重复去脂一次.
6.2净化
水浴中氮气吹干，用1.0ml.甲醇 将上述试液过OasisHLB柱，依次用 0.1%酸溶（19.体积比）溶解残余物，过0.45μm有机相滤膜， 3ml .1%酒石酸淋洗，用5mL甲醇洗脱.洗脱液于40℃供高效液相色谱测定.
6.3测定
6.3.1液相色请条件
液相色谱条件如下：
a）色谱柱：C柱，250mm× pm或相当者b）流动相：甲醇；0.1%磷酸溶激（体积比） 3.9mm（内径） 10 90）;c）检测波长：210nm；d）流速：1.0mL/min1f）进样量：5p e）柱温：40C；
6.3.2色谱测定
按照液相色谱条件对样液及标准工作溶液进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品定量，测定样液和标准工作溶液中被测化合物的响应值 均应在仪器测定的线性范围内.
如果待测样品溶液中被测物的保留时间与标准工作溶液中被测物的保留时间偏差在土2.5%之内，可判定为样品中存在对应的待测物.
在6.3.1色谱条件下泰妙菌素的参考保留时间为7.2min，标准溶液的液相色谱图参见附录A中
图A.1.
6.3.3空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行.
6.3.4结果计算
用色谱数据处理或按式（1）分别计算供试样品中的泰妙菌素残留量，计算结果需扣除空白值.
式中：
X - 试样中待测组分的含量，单位为微克每千克（pug/kg）；由标准曲线得到的样液中泰妙菌素的浓度，单位为微克每升（pg/L）：Ca 由标准曲线得到的空白试验中泰妙菌素的浓度，单位为微克每升（ug/L）：V 样液最终定容体积，单位为升（L）； 最终样液代表的试样质量，单位为千克（kg）.m
6.3.5检测限
本方法在鱼肉中泰妙菌素的检测限为0.05mg/kg.
6.3.6固收率
6.3.6.1邮鱼中回收率：
添加浓度为0.05mg/kg时.回收率为76.2%：添加浓度为0.10mg/kg时，回收率为79.7%；添加浓度为0.20mg/kg时，回收率为98.2%；
6.3.6.2鲈鱼中回收率：
添加浓度为0.05mg/kg时，回收率为77.1%；添加浓度为0.10mg/kg时.回收率为82.9%；添加浓度为0.20mg/kg时，回收率为88.7%；
6.3.6.3斑点叉尾中回收率：
添加浓度为0.05mg/kg时，回收率为76.2%；添加浓度为0.10mg/kg时，回收率为80.1%；添加浓度为0.20mg/kg时，回收率为90.9%.
