中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 4521-2016
出口番茄酱中链霉素和双氢链霉素的测定 液相色谱-质谱/质谱法
Determination of streptomycin and dihydrostreptomycin residues intomato paste for export-LC-MS/MS method
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.本标准起草单位：中华人民共和国新疆出人境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.疫局.本标准主要起草人：巩志国、季新诚、苏敏、李世雨、谢文、王静静、齐冬琴、叶青.
出口番茄酱中链霉素和双氢链霉素的测定 液相色谱-质谱/质谱法
1范围
本标准规定了番茄酱中链霉素和双氢链霉素的测定一液相色谐-质谱/质谱法.本标准适用于番茄酱中链霉素和双氢链霉素残留量的测定，
2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法
3方法提要
处理方法净化，用液相色谱-质谱/质谱仪进行测定和确证，外标法定量. 采用磷酸盐缓冲溶液提取链霉素和双氢链霉素，经硅藻土吸附和串联双柱固相萃取净化相结合的
4试剂和材料
除特殊注明外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1甲醇和乙睛：色谱级.4.2甲酸：纯度98%，色谱级.4.3磷酸：优级纯.4.4乙二胺四乙酸二钠. 4.5盐酸：优级纯.4.6磷酸二氢钾.4.7磷酸盐缓冲溶液（pH=4.8）：称取1.36g的磷酸二氢钾（KHPO）溶解到950mL水中，用1mol/L的盐酸（HC1）调节pH为4.8，然后加人0.15g的乙二胺四乙酸二钠，充分溶解，最后用水去定4.83%的甲酸甲醇溶液：取3.0mL的甲酸，用甲醇定容至100mL. 容到1000mL.4.91mol/1.的盐酸；取8.5ml.的盐酸，用水定容至100ml.4.10乙睛-水（5050，体积比，含0.1%甲酸）：量取50mL水和50mL乙晴混匀，并加入0.1mL甲酸. 4.110.15%的甲酸溶液：量取1.5mL甲酸，用水定容至1L4.1250%甲醇水溶液：量取50mL水和50mL甲醇混匀.4.13标准品：链霉索（Streptomycin）（CAS号57-92-1）和双氢链莓索（Dihydrostreptomycin）（CAS号128-46-1);纯度：>98%.4.14标准储备液：称取适量4.13标准品（精确至0.1mg），用0.3%的甲酸水配制成500mg/L的储备
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液，于0℃~4℃冰箱中避光保存.
4.15标准工作液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成：0.05mg/L..0.10mg/L，0.20mg/L 0.40mg/L 0.80mg/L.的标准系列工作溶液.现用现配，
4.16固相萃取柱：反相固相萃取柱1;Strata-X（500mg/6ml.）或HLB（200mg/6mL）和弱阳离子交换固相萃取2:Strata-X-CW（200 mg/6mL）或WCX（150mg/6 mL).
4.17再生纤维素微孔滤膜：0.2μm. 4.18硅藻土（40 μm~60μm）.
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）.
5.2pH计.
5.3固相萃取装置（SPE）
5.4分析天平：感量为0.1mg和0.01g.
6试样制备和保存
从所取全部样品中取出有位表性样品约500g，湿合均匀，均分或两份，分别装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记.将试样于一18C玲冻保存.
在抽样和制样的操作中，应防止样品污染或发生我留物含量的变化.
7测定步骤
7.1样品处理
7.1.1提取
1min，超声30min，以8000r/min离心10min，离心后的上清液待后续净化. 称取5.00g样品，加人提取液磷酸盐缓冲溶液（4.7）于样品中，定容至20ml.涡旋仪上涡旋
7.1.2初净化
取10.0mL7.1.1中离心后的上清液于15ml的离心管中，同时往离心管中加人1.0g的硅藻土，充分涡旋1min，超声5min，以6000r/min离心10min，离心后的上清液待再净化.
7.1.3串联双柱再净化
依次用6.0ml.甲醇，6.0mL.水分别活化反相固相萃取柱和弱阳离子交换固相萃取柱.待甲醇和水活化溶液全部流出后，用固相萃取柱转接头串接好反相柱（在上部：柱1）和璃阳离子交换柱（在下部：柱2），取7.1.2中离心后待净化的上清液4.0mL加人柱1中，控制流速约为1.0mL/min通过两串接的2
固相萃取柱.待净化液全部流出后，再加人6.0mL（每次加3.0mL.加2次）的提取液磷酸盐缓冲溶液（4.7）于柱1中，等待柱1中潜洗液全部流出后，从上部去除柱1，在柱2中依次加人6.0mL（每次加3.0ml 加2次）的水和3.0mL的50%甲醇水淋洗柱2.柱2中潜洗液全部流出后，抽干1.0min.用12.0ml（每次加4.0mL.加3次）的甲醇（含3%的甲酸）溶液洗脱柱2中的待测物.用15mL试管接收洗脱液，洗脱液于50C水浴下氮气吹干.用1.0mL的50：50（乙晴：水，含0.1%甲酸）溶解残渣，充分涡旋1min.超声1min，过0.2μm的再生纤维素滤膜，滤液供LC-MS/MS测定.
7.2测定
7.2.1液相色谱和质谱条件
参见附录B的表B.1和表B.2
7.2.2液相色谱-质谱/质谱测定
作液应有5个浓度水平.待测样液中链霉素和双氢链霉素的利应值均应在仪器检测的工作曲线范围 根据样品中链霉素和双氢链霉素的含量情况，选定响应值适宜的标准工作液进行色谱分析，标准工内.在7.2.1的色谱条件下，链霉素和双氧链霉素的参考保留时间约为7.3min，标准溶液的选择离子流图参见附录A中图A.1和图A.2
7.2.3液相色谱-质谱/质谱确证
按照7.2.1条件测定样品和标准工作液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准工作液一致，允许偏差小于士2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表1中规定，则可判断样品中存在相应的被测物.
表1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
10~20 <10±30 ±50 相对离子丰度/%允许的相对偏差/% 7.3空白实验 除不加试样外，均按7.1~7.2测定步骤进行 8结果计算和表述 按式（1）分别计算试样中链霉素和双氢链霉素的残留量，计算结果需扣除空白值： (1) 式中： X一试样中被测化合物残留量，单位为微克每千克（μg/kg）：从标准工作曲线上得到化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL.）：V 最终溶液代表的试样质量，单位为克（g）. 样品的最终定容体积，单位为毫升（mL）；
