中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T4800-2017
Protocols for assessment on ELISA mercial diagnostic kitsused in entry-exit animal quarantine
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院，中华人民共和国北京出人境检验检疫局，中华人民共和国深圳出人境检验检疫局，中华人民共和国上海出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：王勤、刘晗、林祥梅、刘建、刘晓飞、马贵平、秦智锋、李健、吴绍强、李晓琳、仇松寅、冯春燕、梅琳、刘丹丹.
SN/T 4800-2017
进出境动物检疫ELISA检测试剂盒质量 评价技术规程
1范围
本标准规定了进出境动物检疫ELISA试剂盒的评价技术规程.本标准适用于指导进出境动物检疫ELISA试剂盒的评价.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
分析敏感性analytical sensitivity
样品中被分析物能够被检测出的最小量，即最低检测限.
实验中将目的因子与其他致病因子区分开来的能力.
重复性repeatability
同一试剂对同一被分析物在相同条件下（设备、操作者、实验室和时间间隔）进行检测所得出的连续和独立的结果之间的一致性.主要通过评价批内重复和批间重复的变异系数来实现.
诊断敏感性diagnostic sensitivity
已知被感染的动物在检测时得到阳性结果的比例.
诊断特异性diagnostic specificity
已知没有被感染的动物在检测时得到阴性结果的比例.
变异系数coefficientofvariation：CV
各个重复的标准差与各个重复的平均值之比.
3.7
试剂盒试剂的不同状态在不同条件贮存后所保持其测定准确性的性能.用试剂盒效期稳定性作为指标来评价.
3.8
再现性reproducibility
由不同实验室的操作者用同一试剂使用不同设备对同一被分析物进行检测所得出的单次测试结果之间的一致性.
4方案制定
4.1总则
根据试剂盒的预期用途和目的制定评价方案.方案中要明确评价样品的数量和来源，待评价试剂盒的数量和标准化处理方法，并明确测定参数和参数指标的要求
4.2评价所需材料和样品的要求
4.2.1一般资料
试剂盒供应商需按照SN/T4738的规定，向评价实验室提供佐证材料，材料要求参见SN/T4738.
4.2.2诊断试剂盒
对于抗原抗体及样品的处理和稀释液有特殊要求，也需要随试剂盒同时提供相应试剂及说明. 试剂盒供应商向评价实验室提供每种至少3个同 型号、同一批次的试剂盒用于评价.如试剂盒
4.2.3评价样品
提供的或经其鉴定过的样品：来源于临床已经确诊的发病动物的样品 用于评价试验的样品必须来源清楚，样品状态明确，包括：由世界动物卫生组织（OIE）参考实验室 或来源于SPF动物的样品：由实验室利用背景明确的菌种、毒株等自行制备的样品：经两种OIE指定或替代方法同时确定为阳性或阴性的样品.
4.3评价参数
主要指分析敏感性、分析特异性、诊断敏感性、诊断特异性、重复性、再现性和效期稳定性.
5方案实施
5.1试剂盒确认
为了确认待评价试剂盒的检测效果，首先取检测试剂盒的阴性对照和阳性对照按照试剂盒的操作说明书进行检测，检测结果相符后，方可进行下一步评价.
5.2参数测定
5.2.1分析敏感性的评价
5.2.1.1检测抗体ELISA
至少选择3份来源明确的阳性参考血清，将这些阳性血清分别进行梯度倍比稀释，每个稀释度设3个重复，用同一批次、同一批号的试剂盒进行检测，以检出阳性结果的最高稀释倍数作为分析敏感性结果.
5.2.1.2检测抗原ELISA
至少选择3份来源明确的标准抗原，将这些标准抗原分别进行梯度稀释，每个稀释度设3个重复，
SN/T 4800-2017
用同一型号、同一批次的试剂盒进行检测，以检出阳性结果的最高稀释倍数作为敏感性分析结果.
5.2.2分析特异性的评价
5.2.2.1检测抗体ELISA
评价实验室选取至少5种与被检物可能有交叉反应的抗体，每个样品设3个重复，用同一型号、同一批次的试剂盒进行检测.
5.2.2.2检测抗原ELISA
评价实验室选取至少5种与被检物可能有交叉反应的抗原，每个样品设3个重复，用同一型号、同一批次的试剂盒进行检测.
5.2.3重复性（批内）的评价
5.2.3.1用同一型号、同一批次号至少3个待评价试剂盒对至少5份样品进行重复性测定，其中阴性、弱阳性和强阳性样品各不少于1份，每个样品设3个重复.
5.2.3.2为减少误差需由两个不同实验人员，在不同时间，用相同样品进行测定.
5.2.3.3重复性检测结果用批内变异系数（CV）表示，变异系数计算方法参照SN/T2435一2010的要求计算.
5.2.4诊断敏感性和诊断特异性的评价
5.2.4.1要求样品总数量不少于200份，其中阴性样品数量不少于80份，阳性样品数量不少于70份，弱阳性样品不少于20份.
5.2.4.2用待评价试剂盒对样品进行测定，记录检测出的阳性和阴性样品数量.按照SN/T2435一2010的要求计算诊断敏感性和诊断特异性.
5.2.5再现性的评价
5.2.5.1再现性的评价至少需要在3个不同的实验室测试同一组样品（盲样）.要求样品数量不少于20份，其中强阳、羽阳和阴性样品数量各不少于5份，每个实验室用于测试的样品应相同，每个样品设3个重复.
5.2.5.2再现性结果用测定的阴阳性符合率和不同实验室间的变异系数表示，变异系数计算方法参照SN/T2435-2010的要求计算
5.2.6效期稳定性的评价
在试剂盒标明的保存条件下将待评价试剂盒保存至所标明的有效期，期间依据所标明的有效期每隔1/3、1/2和2/3有效期的时间对试剂盒进行检测，并与待评价试剂盒的数据进行比较，以评价试剂盒在其标明的保存条件下的效期稳定性.
6结果报告及
评价实验室将相关参数的测定结果进行统计分析，根据相关的评价指标形成实验室结果，汇总实验结果，出具评价报告并提交进出境动物检疫试剂质量评价专家委员会审议，经进出境动物检疫试剂质 量评价专家委员会审议通过后方可将评价报告给试剂盒供应商.
评价结果只对样品和试剂盒供应商负责.未经同意，不得对外公开.
