中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 4812-2017
进出口食用动物氨丙啉药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
Determination of amprolium residues in live animal for import and exportLC-MS/MSmethod
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院.本标准主要起草人：涂小珂、陈沛金、曾少灵、罗耀、岳振峰、胡运发、叶刚、康海宁.
进出口食用动物氨丙啉药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
1范围
谱检测和确证方法. 本标准规定了兔、猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅等进出口食用动物中氨丙啉药物残留量的液相色谱-质谱/质
本标准适用于兔、猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅的血液及兔、猪、牛、羊尿液中氨丙啉药物残留量的测定.
本标准适用于出入境检验检疫
2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
取净化，吹氮浓缩后用流动相溶解，波相色谐-质谱质谱仪测定，外标法定量.
4试剂材料
除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GBT6682规定的一级水.
4.1甲醇：色谱纯，4.4乙酸铵：色谱纯.
4.2甲酸：色谱纯.
4.3乙晴：色谱纯.
4.50.005mol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：准确称取0.3854g乙酸铵（4.4），用水溶解并转移至1000mL容量瓶中，加人1.00mL甲酸（4.2），用水定容至刻度.
4.6乙酸铵溶液-甲醇溶液（9：1.体积比）：准确量取90mL乙酸铵溶液（4.5）至100mL容量瓶中，加人甲醇（4.1），定容至刻度.
4.7无水硫酸镁：550C灼烧4h，干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用.
4.8氯化钠：优级纯.
4.9乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）吸附剂.
4.10石墨化炭黑.
4.11标准物质：盐酸氨丙啉（amproliumhydrochloride.CAS：137-88-2），纯度大于98%.
4.12标准储备溶液：准确称取适量标准物质（4.11），以甲醇溶液配制氨丙啉浓度为1000μg/mL的标准溶液，-18C避光保存.
4.13标准工作溶液：移取适量的标准储备溶液（4.12），以甲醇配制浓度为10μg/mL的标准溶液，4℃
SN/T 4812-2017
避光保存，可使用1个月.
4.14微孔滤膜：0.22pm，水系.
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）.5.2电子天平：感量0.0001g、0.001g和0.1g.5.3离心机：10000r/min.5.4氮吹浓缩仪.5.6移液器：量程10μL~100μL、100L~1000pL和1000μL~5000μL. 5.5旋涡混匀器.5.7聚丙烯离心管：15mL，具塞.
6试样的制备与保存
血浆：将新鲜血液采集后加人含抗凝剂的试管中，混匀.10C以下.5000r/min离心10min，取血浆备用：尿液：5000r/min离心去除沉淀物，取上清液备用.
血浆、尿液试样均分为两份，装入洁净容器，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放.
在制样操作过程中，应防止样品被污染或残留物含量发生变化.
7测定步骤
7.1提取
吸取1mL试样于15mL聚丙烯离心管中，加人2.5mL乙晴（4.3），涡旋混匀1min，再加人0.5g无水硫酸镁（4.7）和1.0g氯化钠（4.8），涡旋混匀1min，10C以下，10000r/min离心5min，转移上清5mL 后再加人2.5mL乙睛，涡旋1min.10000r/min离心5min，合并两次提取的上清液并用乙晴定容到
7.2净化
上清液加人50mg乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）（4.9），如血液样品色素过重再加人10mg石墨化炭黑（4.10），涡旋1min，静止10min.准确吸取2.5mL上清液于氮吹浓缩仪40C吹氮浓缩至近干，加 人1mL0.005mol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）-甲醇（9：1.体积比）（4.6），涡旋混匀1min，过0.22μm水系滤膜，液相色谱-质谱/质谱仪测定.
7.3标准工作溶液的制备
取空白样品，按7.1和7.2操作，制备空白样品提取液.吸取适量标准工作溶液（4.13），用空白样品提取液配制一系列标准工作溶液，质量浓度为2pg/L、5pg/L、10μg/L、20μg/L，、50μg/L、100μg/L
7.4测定
7.4.1液相色谱条件
液相色谱条件如下：
b）柱温：35℃；c）进样量：10pL；d）流动相：0.005mol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（A），甲醇（B）；e)流速：0.2mL/min;梯度洗脱条件见表1.
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min A/% B/%0 90 104 0 90 105.0 10 907 0 90 9010.0 90 10
7.4.2质谱条件
7.4.2.1离子化模式：电喷雾离子源（ESI），正离子模式. 7.4.2.2质谱扫描方式：选择反应监测（SRM）.7.4.2.3其他参考质谱条件参见附录A.
7.4.3液相色谱-质谱/质谱测定
7.4.3.1定性测定
化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且定性离子的相对丰度与浓度相当的标 在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在士2.5%之内；准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围.
表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50%
7.4.3.2定量测定
量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内.在上述仪器条件下，氨丙啉的保留时间 以峰面积为纵坐标，工作溶液质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定参见附录A表A.1.标准溶液的选择反应监测色谱图参见附录B中图B.1.
7.4.4空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行.
8结果计算和表述
按式（1）计算血液、尿液样品中目标物残留量，计算结果需扣除空白值：
