B 46 ICS 65.120
中华人民共和国国家标准 GB/T8381.7-2009代替GB/T8381.7-2005
饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法
Determination of olaquindox in feed Highperformance liquid chromatography
2009-05-12发布2009-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 中国国家标准化管理委员会
GB/T 8381.7-2009
前言
本标准代替GB/T8381.7-2005（饲料中喹乙醇的测定高效液相色谱法》。
本标准与GB/T8381.7-2005相比主要变化如下： 在试样提取过程中增加了固相萃取净化方法，流动相不再做pH调整。
本标准由全国何料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。
本标准负责起草单位：农业部饲料工业中心、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）、 中国农业大学。
本标准主要起草人：杨文军、张画英、王宗义、贺平丽。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T 8381. 72005.
GB/T 8381.7-2009
饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法
1范围 本标准规定了以高效液相色谱测定饲料中喹乙醇的方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中喹乙醇的测定，最低定量限为1mg/kg， 检出限为0.1mg/kg。
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，IS3696：1987，MOD） 3原理 试样中的喹乙醇以甲醇溶液提取，固相萃取小柱净化，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测， 外标法定量分析。
4试剂和溶液 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的三级用水。
警告一隆乙醇对光敏感，应避光操作及使用棕色容器 4.1甲醇（色谱纯）。
4.2提取液：甲醇+水=5+95. 4.3高效液相色谱流动相：甲醇和超纯水（采用二元梯度）。
4.4淋洗液1：0.02mol/L盐酸。
移取1.67mL盐酸定容至1000mL. 4.5淋洗液2：0.1mol/L盐酸。
移取8.33mL盐酸定容至1000ml。
4.6淋洗液3甲醇+水=5+95。
4.7洗脱液：甲醇+水=40+60。
4.8唑乙醇标准储备液：准确称取唑乙醇标准品0.05020g（含量≥99.6%），于50mL棕色容量瓶中， 超声溶解，冷却至室温，定容至刻度，摇匀使其溶液浓度为1mg/mL，储存于-18C冰箱中，可使用一 个月。
4.9唑乙醇标准工作液：准确量取标准储备液（4.8）于容量瓶中，用洗脱液（4.7）稀释，依次配制成浓度 为 0. 1 μg/mL、1. 0 μg/mL、5. 0 μg/mL ,10, 0 μg/mL、20. 0 μg/mL50. O μg/mL、100, 0 μg/mL 的标准 溶液，现配现用。
5仪器 5.1离心机：3500r/min 5.2摇床：转速可达110r/min。
5.3螺口离心管：50ml
GB/T 8381.7-2009 5.4超声波清洗器。
5.5微孔有机相滤膜：孔径0.22μm， 5.6固相萃取小柱（SPE）：OasisHLB1mL（30mg）或性能相当者。
5.7固相萃取仪。
5.8恒温振荡器。
6试样制备 选取有代表性饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过0.42mm孔径筛，混匀，装 人密闭容器中，避光低温保存，备用。
7分析步骤 7.1试液的制备 7.1.1提取 下恒温振荡器振荡速度110r/min，避光振荡45min.提取液在3500r/min下离心10min，上清液经 滤纸过滤滤液作为SPE小柱净化使用。
7.1.2净化 SPE小柱的活化：临用前分别向SPE小柱中加人2mL甲醇（4.1）和2mL超纯水，对小柱进行活 化。
将滤液（7.1.1）2mL加人活化好的SPE小柱，分别用2mL淋洗液1（4.4）、淋洗液2（4.5）和淋洗 液3（4.6）淋洗小柱，并将小柱吹干.最后用2mL洗脱液（4.7）洗脱。
7.1.3上机 洗脱液过0.22pm有机相滤膜，滤液上机测定。
7.2色谱条件 7.2.1色谱柱：具有C填料的柱子（粒度为5μm），柱长250mm，内径4.6mm， 7.2.2流动相及洗脱程序：如表1. 表1梯度洗脱程序 时间/min超纯水/%甲醇/% 08515 58515 103070 143070 188515 258515 7.2.3流速：1.00mL/min。
7.2.4进样体积：10 gL~20μlL。
7.2.5检测器：紫外检测器，检测波长260nm。
8定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。
向液相色谱柱中注人待测定喹乙醇标准工作液及试 样溶液（7.1.3），得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。
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GB/T 8381.7-2009
9结果计算 9.1试样中喹乙醇的质量分数u（mg/kg）按式（1）计算： P,×V×c,×V u=PXmXV 式中： P试样溶液峰面积值： V样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）； -标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V标准溶液进样体积，单位为微升（pL）： P-标准溶液峰面积平均值： m试样质量，单位为克（g）： V试样溶液进样体积，单位为微升（pL）。
9.2平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。
10重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。
国家标准第1号修改单
本修改单经国家标准化管理委员会于2019年6月4日批准，自2019年6月4日起实施。
柱（SPE）：Oasis HLB3 mL（60 mg）或性能相当者”。
二、将7.1.2净化中SPE小柱的活化修改为“临用前分别向SPE小柱中加人3mL甲醇（4.1）和 3mL超纯水。
将滤液（7.1.1）2mL加人活化好的SPE小柱，分别用3mL淋洗液1（4.4）、淋洗液2 （4.5）和淋洗液3（4.6）淋洗小柱，并将小柱吹干.最后用2mL洗脱液（4.7）洗脱。
”...
