中华人民共和国国家标准
GB/T 15670.14-2017部分代替GB/T156701995
农药登记毒理学试验方法 第14部分：细菌回复突变试验
Toxicological test methods for pesticides registrationPart 14:Bacterialreverse mutation test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分：
第1部分：总则；第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法：第3部分：急性经口毒性试验序贯法； 第4部分：急性经口毒性试验概率单位法；第5部分：急性经皮毒性试验；第6部分：急性吸人毒性试验；第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验：第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验； 第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验：第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验；第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验；第12部分：短期重复吸人染毒（28天）毒性试验：第13部分：亚慢性毒性试验： 第14部分：细菌回复突变试验；一第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验；-一第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验；第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验； 第18部分：嘀齿类动物显性致死试验：第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验；第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验：第21部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS）试验：第23部分：致畸试验； 第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验：第24部分：两代繁殖毒性试验；第25部分：急性迟发性神经毒性试验；第26部分：慢性毒性试验；第27部分：致癌试验； 第28部分：慢性毒性与致癌合并试验；第29部分：代谢和毒物动力学试验.本部分为GB/T15670的第14部分.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本部分部分代替GB/T15670-1995《农药登记毒理学试验方法》. 本部分与GB/T15670-1995的鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验部分相比主要变化如下：修改和调整了标准的总体结构和编排格式；增加了一些章节内容（见第1章、第2章、第4章、5.6、5.7、6.3、7.3.2、7.3.3和第9章）；修改了对试验菌株要求的内容（见6.1，1995年版的14.3.1）； 修改了部分试剂配制的内容（见5.3，1995年版的14.3.3）：
GB/T 15670.14-2017
一修改了剂量和分组的内容（见7.2，1995年版的14.3.4）；一修改了结果判定的内容（见8.2，1995年版的14.3.8）.本部分由中华人民共和国农业部提出并归口.本部分起草单位：农业部农药检定所.本部分主要起草人：肖杭、环飞、张丽英、陶传江. 本部分所代替标准的历次版本发布情况为：*GB/T 156701995
第14部分：细菌回复突变试验 农药登记毒理学试验方法
1范围
GB/T15670的本部分规定了细菌回复突变试验的基本原则、方法和要求.本部分适用于为农药登记而进行的细菌回复突变试验.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
2.1
回复突变试验reverse mutation test
利用一组鼠伤寒沙门氏菌和/或大肠杆菌检测引起细菌碱基置换或移码突变的化学物质所诱发的需要某种氨基酸的菌株（分别为组氨酸或色氨酸）成为不需要外源性供应氨基酸的菌株的突变，即是由营养缺陷型回变到野生型.
2.2
引起DNA分子中一个或多个碱基对置换的物质.在回复突变试验，此改变可能发生在细菌基因组的原突变部位或另一个部位.
2.3
移码型致突变物frameshift mutagens
引起DNA分子增加或丢失一个或多个碱基对的物质.
3试验目的
检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性.
4试验概述
对的置换、插人或缺失.原理是通过观察试验菌株在缺乏所需要氨基酸的培养基上的生长情况，检测试 细菌回复突变试验利用鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌来检测点突变，涉及DNA的一个或儿个碱基验菌株是否恢复合成必需氨基酸的能力，评价受试物诱发突变的能力.
5培养基和试剂
注：培养基成分或试剂至少应是化学钝，无诱变性.避免重复高温处理选择适当保存温度和期限如肉汤保存于4℃不超过6个月，其他详见下述各培养基及溶液说明.
5.1营养肉汤培养基
牛肉浸膏 5g氯化钠 胰陈 5g 10 g磷酸氢二钾（KHPO3HO） 2.6 g加蒸馏水至 1000 mL加热溶解，调节pH至7.4，分装后0.103MPa，20min灭菌，保存期不超过6个月.
5.2营养肉汤琼脂培养基
琼脂粉 1.5g加营养肉汤培养基至 100 mL加热溶解，调节pH至7.4，0.103MPa，20min灭菌.
5.3底层培养基（即最低营养培养基）
5.3.1Vogel-Bonner（V-B）培养基
柠橡酸（CHO HO） 2.0 g磷酸氢二钾（KHPO） 10.0 g磷酸氢铵钠（NaNHHPO4HO） 3.5 g硫酸镁（MgSO;7HO） 加蒸馏水至 0.2 g 200 mL
逐个将化学物在少量蒸馏水中单独溶解后，硫酸镁水溶液在最后缓慢加人，加蒸馏水至200mL.0.103MPa，20min灭菌，4C保存备用.
5.3.220%葡萄糖溶液
葡萄糖 20.0 g加蒸馏水至100mL，0.055MPa，20min灭菌.
5.3.31.5%底层琼脂培养基
琼脂粉 15 g加蒸馏水至 700 mLV-B培养基 200 mL20%葡萄糖溶液 100 mL
按每Ⅲ25mL（相对于90mm平m）制备平板，冷凝固化后倒置于37C培养箱中24h，备用. 首先将前两种成分于0.103MPa下高压灭菌20min后，再加人后两种成分，充分混匀倒底层平板.
5.4顶层培养基
5.4.1顶层琼脂
琼脂粉 3.0 g加蒸馏水至 氯化钠 2.5 g 500 mL
