中华人民共和国国家标准
GB/T17999.2-2008代替GB/T 17999.1-1999
SPF chicken-Microbiological surveillance-Part 2:Hemagglutination inhibition test for SPF chicken
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T17999《SPF鸡微生物学监测》分为10个部分：
第I部分：SPF鸡微生物学监测总则； 第2部分：SPF鸡红细胞凝集抑制试验：第3部分：SPF鸡血清中和试验；-第4部分：SPF鸡血清平板凝集试验：第5部分：SPF鸡琼脂扩散试验； 一第6部分：SPF鸡酶联免疫吸附试验：第7部分：SPF鸡胚敏感试验：一第8部分：SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验；第9部分：SPF鸡试管凝集试验：一第10部分：SPF鸡间接免疫荧光试验.
本部分为GB/T17999的第2部分.
本部分修订参照了GB/T18936-2003《高致病性禽流感诊断技术》、SN/T1109-2002《新城疫微量红细胞凝集抑制试验操作规程》、SN/T1182.2-2004《禽流感微量红细胞凝集抑制试验》、NY/T551-2002《产蛋下降综合征诊断技术》、OIE（陆生动物（哺乳动物、禽鸟和蜜蜂）诊断试验和疫苗手册》（第五版）中的有关规定.
本部分代替GB/T17999.1-1999（SPF鸡红细胞凝集抑制试验3.
本部分与GB/T17999.1-1999相比主要变化如下：
增加了规范性附录A"试剂的配制”和资料性附录B"1%鸡血红细胞悬液的制备”：
增加了对V形孔微量血凝板进行试验的结果判定：
对禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽腺病毒Ⅲ群（EDS）鸡毒支原体和滑液囊支原血凝抑制抗体的判定标准进行了修改.
本部分的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录.
本部分由中华人民共和国农业部提出.
本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口.
本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法斯家禽有限公司.
本部分主要起草人：曲连东、刘家森、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、姜赛、司昌德、于海波、孟庆文.
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：
GB/T 17999. 11999
SPF鸡微生物学监测 第2部分：SPF鸡红细胞凝集抑制试验
1范围
GB/T17999的本部分规定了红细胞凝集抑制试验的技术要求.
本部分适用于对SPF鸡进行以下病原微生物的血凝抑制抗体检测：禽流感病毒（AvianInfluenzaVirus)，传染性支气管炎病毒（lnfectious Bronchitis Virus），新城疫病毒（Newcastle Disease Virus），禽 腺病毒Ⅲ群（减蛋综合征病毒）（Avian Adenovirus Group Il），鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepricum），清液囊支原体（Mycoplasma synouiae）.
2原理
可用已知病原微生物检测相应的血凝抑制性抗体. 许多病原微生物具有凝集动物红细胞的能力这种凝集红细胞的能力能被特异性抗体所抑制，因此
3试剂和器材
3.1试剂
3.1.2阴性、阳性血清.3.1.3被检血清.3.1.4鸡红细胞.3.1.50.85%氯化钠（NaC1)（见附录A）.3.1.6阿氏液（见附录A）.
3.1.1血凝抗原.
3.2.196孔微量血凝板（U形孔或V形孔）.3.2.2微量移液器（量程为25L50gL、100pL）或可调微量移液器（量程涵盖25gL、50L、100pL)及吸头.3.2.4离心机与刻度离心管. 3.2.3水浴锅.
4操作程序
4.1红细胞悬液的制备和抗原血凝效价测定
4.1.11%鸡红细胞悬液的制备参见附录B.
4.1.2抗原血凝效价测定
4.1.2.1于96孔微量血凝板的第1孔~第12孔加入生理盐水25uL，共作2排.每排的第1孔加人抗原25uL.用微量移液器，从第1孔～第11孔对抗原作系列倍比稀释：即将第1孔的抗原与生理盐水推，直至第11孔.从第11孔中吸出25μL弃去，此孔抗原的最终稀释度为1：2（即11log：）.第12 用移液器反复吹吸3次后，吸出25aL移至第2孔，再反复吹吸3次后，吸出25gL移至第3孔，依此类孔作为对照孔.
