中华人民共和国国家标准
GB/T 17999.5-2008代替GB/T 17999.4-1999
SPF chicken-Microbiological surveillancePart 5:Agar gel precipitation test for SPF chicken
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T17999《SPF鸡微生物学监测》分为10个部分：
第I部分：SPF鸡微生物学监测总则； 第2部分：SPF鸡红细胞凝集抑制试验；-第3部分：SPF鸡血清中和试验；-第4部分：SPF鸡血清平板凝集试验；第5部分：SPF鸡琼脂扩散试验； 第6部分：SPF鸡酵联免疫吸附试验：一第7部分：SPF鸡胚敏感试验：-第8部分：SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验；第9部分：SPF鸡试管凝集试验；一第10部分：SPF鸡间接免疫荧光试验.
本部分为GB/T17999的第5部分.
本部分修订参照了GB/T18936-2003《高致病性禽流感诊断技术》、NY/T540-2002《鸡病毒性关节炎琼脂凝胶免疫扩散试验方法》.NY/T556-2002（鸡传染性喉气管炎诊断技术3、OIE《陆生动物（哺乳动物、禽乌和蜜蜂）诊断试验和疫苗手册3（第五版）中的有关规定.
本部分代替GB/T17999.4-1999（SPF鸡琼脂扩散试验》.
本部分与GB/T17999.4-1999相比主要变化如下：
增加了加样示意图、结果判定示意图以示说明；
增加了附录A"马立克氏病病毒抗原琼脂扩散检验的程序”：
增加了附录B"试剂的配制”
本部分的附录A、附录B为规范性附录.
本部分由中华人民共和国农业部提出.
本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口.
本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法斯家禽有限公司.
本部分主要起草人：曲连东、姜骞、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、刘家森、司昌德、郭东春、于海波、孟庆文.
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：
-GB/T 17999. 41999.
第5部分：SPF鸡琼脂扩散试验 SPF鸡微生物学监测
1范围
GB/T17999的本部分规定了琼脂扩散试验的技术要求.
Virus）、传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus）、传染性法氏囊病病毒（Infectious Bursa 本部分适用于对SPF鸡进行以下病原微生物的血清抗体检测：禽流感病毒（Avian InfluezaDisease Virus）、传染性气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus）、禽痘病毒（Fow] PoxVirus）、禽脑脊髓炎病毒（Avian Encephalomyelitis Virus）、网状内皮增生症病毒（Retieuloendotheliosis腺病毒I群（Avian Adenovirus GroupI）、多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multacida）.本部分同样适用 Virus）、禽呼肠孤病毒（病毒性关节炎）（Avian Reovirus）、马立克氏病病毒（MareksDiseaseVirus）、禽于对SPF鸡进行马立克氏病病毒（Marek’sDiseaseVirus）抗原的检测（见附录A）.
2原理
淀线.采用已知抗原检测相应的抗体，或已知抗体鉴定相应的抗原. 抗原、抗体在含有电解质的琼脂凝胶中，可以向四周自由扩散，二者互相结合，在最适比例处出现沉
3试荆和材料
3.1试剂
3.1.2标准阳性血清. 3.1.1琼扩抗原或抗体.3.1.3被检血清或羽简.3.1.40.01mol/L、pH7.2的8%氯化钠磷酸盐缓冲溶液（见附录B).3.1.50.01mol/L、pH6.4的8%氯化钠磷酸盐缓冲溶液（检测禽流感病毒抗体时使用，见附录B）. 3.1.6优质琼脂粉或琼脂糖.
3.2材料
琼扩板，打孔器，移液器.
4操作程序
4.1琼脂板制备
将1g优质琼脂粉或0.8g~1.0g琼脂糖加入100mL的0.01mol/L、pH7.2的8%氯化钠磷酸缓冲液中（检测禽流感病毒抗体时使用），水浴加热融化，稍凉（60C～65C）.倒人琼扩板内（厚度为3mm），待琼脂凝固后，4C冰箱保存备用.
4.2打孔
用打孔器在琼脂板上按7孔梅花图案打孔，孔径3mm~4mm.孔距3mm.用8号针头挑出孔内琼脂，挑出时从孔一侧边缘插人针头，轻轻移动，等空气进入孔底后，再向上挑出.
4.3封底
用酒精灯轻烤平Ⅲ底部至微融化，以防侧漏.
4.4加样
用移液器吸取抗原悬液，滴人中间孔（图1中的号孔），周围①、④号孔加阳性血清，其余孔加被检
