GB/T 18397-2014
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替GB/T18397-2001（复合预混合何料中泛酸的测定高效液相色谱法》。
本标准与GB/T18397-2001相比主要变化如下： 一标准名称由（复合预混合饲料中泛酸的测定高效液相色谱法》改为（预混合饲料中泛酸的测 定高效液相色谱法》： 50mg以上“修改为“本标准测定泛酸的检出限为5mg/kg，定量限为20mg/kg”； 一样品提取剂不加EDTA，直接采用流动相进行提取： 一流动相用乙晴与0.05%磷酸溶液的混合液代答磷酸缓冲液： 结果计算中，用外标法多点校正或单点校正代替原来的”单点校正”。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口。
本标准起草单位：江西省兽药饲料监察所、通威股份有限公司。
本标准主要起草人：符金华、杨发树、文虹、饶辉、刘耀敏、张风杆、樊品、赵艳。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T 18397-2001.
GB/T 18397-2014
预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法
1范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定预混合饲料中泛酸含量的方法。
本标准适用于复合预混合饲料、维生素预混合饲料中泛酸的测定。
本标准测定泛酸的检出限为5mg/kg，定量限为20mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1何料采样 3原理 试样中的泛酸经乙晴磷酸水溶液提取，离心，过滤，用C色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法 定量。
4试剂和溶液 除特殊注明外，本标准所使用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的二级用水。
4.1磷酸：含量≥85%。
4.2乙晴：色谱纯。
4.30.05%磷酸溶液：将0.5mL磷酸（4.1)加人容量瓶中，并定容至1000mL. 4.4D-泛酸（或D-泛酸钙）标准溶液。
4.4.1标准贮备液：准确称取纯度大于99.0%的D-泛酸或D-泛酸钙标准纯品适量于100mL容量瓶 中，用流动相溶解，定容，使该标准贮备液的浓度含泛酸为1000μg/ml。
此标准溶液在4C可保存三 个月，泛酸浓度=D-泛酸钙的浓度×0.920。
4.4.2标准工作溶液：分别准确吸取标准备液（4,4.1)0.5mL.1.0mL.2.0mL.5,0mL，10.0mL于 100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，得到浓度分别为5.0μg/mL，10.0μg/mL，20.0μg/ml， 50.0μg/mL，100.0μg/mL的泛酸标准工作液。
现用现配。
5仪器和设备 5.1分析天平：感量0.0001g。
5.2离心机：转速3000r/min. 5.3摇床。
GB/T 18397-2014 5.4超声波清洗器。
5.5样品筛：孔径0.28mm. 5.6高效液相色诺仪，配有紫外检测器（或二极管矩阵检测器）。
6试样的制备 按GB/T14699.1规定，取有代表性饲料样品至少500g，四分法缩减至少100g.磨碎，过0.28mm 孔径样品筛，混匀装入密闭容器中，避光低温保存备用。
7分析步骤 7.1提取
具塞锥形瓶中。
准确加人50mL流动相，于超声波水浴提取15min，或置于摇床上振摇提取20min，静 置。
取适量溶液3000r/min离心5min，离心后上清液经过0.45μm滤膜过滤，滤液供高效液相色谱 仪分析用。
7.2测定 7.2.1液相色谱参考条件 色谱柱：C柱，柱长150mm，内径4.6mm-粒度5μm，或具有相同性能的色谱柱： 流动相：将50mL的乙晴加人到950mL磷酸溶液（4.3）中混匀； 流速：1.0 mL/min; 进样量：10xL: 柱温：30℃； 检测器：紫外检测器（或二极管矩阵检测器PDA）使用波长200nm. 7.2.2液相色谱测定 分别取适量的标准工作液（4.4.2）和试样溶液（7.1），按7.2.1列出的条件进行液相色谱分析测定。
按照保留时间进行定性，以标准工作液作单点或多点校准，并用色谱峰面积定量，待测样液中泛酸的响 应值应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析，泛酸色谱图参见附录A。
8结果计算与表示 8.1结果计算 试样中泛酸的含量（X），以质量分数表示，按式（1）计算。
x=cXVx 式中： X试样中泛酸的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c试样溶液中泛酸的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V提取时加入的流动相总体积，单位为毫升（mL）； 试样质量，单位为克（g）；
GB/T18397-2014 》一稀释倍数。
8.2结果表示 测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。
9重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的相对偏差不大于10%。
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