中华人民共和国国家标准
GB/T 18448.2-2008代替GB/T18448.2-2001
Laboratory animal-Method for examination of Toxoplasma gondii
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T18448《实验动物》由10项实验动物寄生虫检测方法组成.本部分为GB/T18448的第2部分（实验动物弓形虫检测方法》. 本部分自实施之日起代替GB/T18448.2-2001.本部分与GB/T18448.2-2001相比主要技术差异如下：a）增加弓形虫酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫酶染色试验（IEA），将PCR检测方法列人附录内容，保留间接血凝试验（IHA）作为推荐方法之一；本部分附录A是规范性附录.本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口.本部分起草单位：全国实验动物标准化技术委员会.本部分主要起草人：潘振业、屈霞琴、陈俏梅、李冠民、王彦平. 本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T 14926. 341994 GB/T 18448 2-2001
实验动物弓形虫检测方法
1范围
本部分适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、大及猴等实验动物弓形虫的检测.
2原理
根据免疫学原理，采用弓形虫抗原检测被检动物血清中的弓形虫抗体.
3主要试剂和器材
3.1试剂
3.1.1ELISA抗原
3.1.1.1特异性抗原
弓形虫（RH株）速殖子腹腔接种清洁级以上实验小鼠（KM、1CR、BALB/c等均可），3d~5d后，以PBS洗3次.沉淀物加适量蒸馏水反复冻融5次，或用超声波处理后，10000r/min离心30min，取上 无菌生理盐水灌洗被接种小鼠的腹腔，收集含有虫体的小鼠腹腔液，3000r/min离心10min，取沉淀，清液.上清液用葡聚糖凝胶G200进行纯化（柱内径×柱高：1.5cm×60cm），流速为0.2mL/min.每管收集2mL左右.共收集60管以上.分别测定每个收集管中蛋白在280nm下的吸光度值.分离纯化后，出现2个蛋白峰；将第一峰各管合并，即为弓形虫特异性抗原（也称弓形虫可溶性抗原）.
3.1.1.2正常抗原
以无菌生理盐水注射清洁级以上实验小鼠（与制备抗原的小鼠同品种或品系）腹腔，3d~5d后，以无菌生理盐水灌洗被注射小鼠腹腔，收集小鼠腹腔液，3000r/min离心10min，取沉淀，PBS洗3次.抗原， 沉淀物加适量蒸馏水反复冻融5次，或用超声波处理后，10000r/min离心30min，取上清液，即为正常
3.1.2抗原片
弓形虫RH株速殖子腹腔接种清洁级以上实验小鼠（KM、1CR、BALB/c等均可），3d~5d后处死，收取虫体，胰酵消化，以一定浓度涂片，充分晾干后冷丙酮固定，一20C保存.
3.1.3弓形虫抗原致敏绵羊红细胞
将绵羊红细胞与一定浓度的酸液反应，制成化红细胞，然后，用弓形虫可溶性抗原在适宜的条件下致敏薪化红细胞制成弓形虫抗原致敏绵羊红细胞.
3.1.4正常对照绵羊红细胞.
3.1.5阳性对照血清
自然感染弓形虫的相应动物抗体阳性血清，或弓形虫免疫血清.
3.1.6阴性对照血清
确证无弓形虫感染的动物血清.
3.1.7酶结合物
辣根过氧化物酶标记的抗小鼠、大鼠、地鼠、原鼠、兔、犬和薪IgG抗体；或辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A（SPA).
3.1.8荧光素结合物
异硫氰氢酸荧光素标记的抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、大和猴IgG抗体.
