中华人民共和国国家标准
GB/T 18651-2002
牛无浆体病快速凝集检测方法
Methods offastagglutination testfor bovine anaplasmosis
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
言
过去认为无浆体（anaplasma）是原虫，现确定是一种立克次氏体，译名还有微粒孢子虫、无形体等，根据生物学特征，“无浆体”最为确切，因此本标准中用此名.牛无浆体病是一种牛血液传播病.牛一且感染，即可成为终生带虫者，使养牛业造成很大经济损失.世界动物卫生组织[WorldOrganization for Animal Health（英） Office Intentional des Epizootic（法），OIE将本病列为B类传染病，本病也是我国出人境动物检疫对象之一.
得到广泛应用.我国曾报道过用补体结合试验诊断牛无浆体病，但因部分血清有抗补体作用，面常被误判，目前，国内尚无卡片凝集检测标准.
本标准以OIE推荐技术为依据，参考了澳大利亚和美国检测方法，抗原保存期为一年到三年，试验温度范围为25C~28C.
本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口.
本标准起草单位：农业部动物检疫所.
本标准主要起草人：吴鉴三、张肖正.
中华人民共和国国家标准
牛无浆体病快速凝集检测方法
GB/T 18651-2002
Methods of fast agglutination testfor bovine anaplasmosis
1范围
本标准规定了牛无浆体病快速凝集检测方法.本标准适用于牛无浆体病的诊断.其他动物无浆体病的诊断亦可参照本方法.
2试剂和器械
2.1试剂
a）无浆体凝集抗原，4C保存；b）阴性协同血清（牛血清因子），-70C~-80C保存；c）阳性对照血清，-20C保存；d）阴性对照血清，一20C保存. 以上试剂由制标单位提供.
2.2器械
2.2.1微量移液器：5pl、10pL或5pL~25yL（连续可调）.2.2.2微量移液器头若干个.2.2.3试验用板：取85mm×12.5mm洁净透明塑料平板，用油漆或油性记号笔划成4排×6个区位.
3操作步骤
实验应在25C～28C环境下进行.3.1被检血清按常规采集和分离，从采集到第一次检测前，要在室温放置38h~48h，然后冷藏或冻存3.2取出凝集抗原、阴性协同血清、阳性和阴性对照血清以及被检血清，在25C～28C下放置 备用，长期低湿保存会使阳性率下降.15 min~20 min.3.3同时在平板第一排左起1、2区位划上阳性（十）和阴性（-）符号，其余各区位依次编上被检血清号. 3.4用微量移液器在编号区位内按号分别加阳性、阴性对照血清和待检血清10pL.3.5在各区位加凝集抗原5pL，靠近血清，互不接触.3.6在各区位抗原旁加阴性协同血清10L，互不接触.3.7用牙签将各区位的三种反应物摊成液面（约成人小指甲盖面积），混合均匀.做一份血清换用一根3.8用手轻轻晃动该平板，在4min～8min内，当阳性对照血清开始出现凝集反应时，对着黑色背景 牙签.判读结果.
4判定标准
4.1阳性对照血清出现颗粒清晰的凝集现象.4.3被检血清凡出现可辨认的凝集颗粒的凝集现象，均判为阳性反应. 4.2阴性对照血清没有可辨认的任何凝集颗粒.
