中华人民共和国国家标准
GB/T20748-2006
牛肝和牛肉中阿维菌素类药物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Methodfor the determination ofavermectinsresiduesin bovine liver and musclesLC-MS-MSmethod
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准的附录A和附录B为资料性附录.本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出. 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口.本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局.本标准主要起草人：庞国芳、林峰、林海丹、吴映璇、谢守新.
本标准系首次发布的国家标准.
牛肝和牛肉中阿维菌素类药物 液相色谱-串联质谱法 残留量的测定
1范围
本标准规定了牛肝和牛肉中伊维菌素（ivermectin）、阿维菌素（abamectin）、多拉菌素（doramectin）和爱普瑞菌素（eprinomectin）残留量的液相色谱-申联质谱测定方法.
本标准适用于牛肝和牛肉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素残留量的测定.
本标准的方法检出限：伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱菩瑞菌素均为4μg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
(GB/T 6379. 12004 ISO 5725-1:1994 IDT)
性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，1SO5725-2：1994，IDT） GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，negISO3696：1987）
牛肝和牛肉中残留的阿维菌素类药物用乙晴提取后，用中性氧化铝柱净化，液相色谱-申联质谱检测.
4试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1乙晴：色谱纯. 4.2冰乙酸.4.3中性氧化铝：Brockmann活度1级或相当者.4.4无水硫酸钠：经650C灼烧4h.置于干燥器中备用.4.5中性氧化铝净化柱：取一空的固相萃取柱管，下部填人少量脱脂棉，装人2g中性氧化铝（4.3），上部再填充4g无水硫酸钠，使用前装填. 4.6三乙胺.4.7伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、爱普瑞菌素标准物质：纯度≥99%.4.8标准储备溶液：100μg/mL.准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和爱普瑞菌素标准物质，用乙晴分别配制成100pg/mL的标准储备溶液，一18C贮存，爱普瑞菌素标准储备溶液可使用3个4.9混合标准储备溶液：0.5pg/mL.准确吸取0.5mL伊维菌素、网维菌素、多拉菌素和爱善瑞菌素 月，伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素储备溶液可使用1年.标准储备溶液至100mL容量瓶中，以乙晴稀释并定容.一18C贮存，可使用3个月.
GB/T 20748-2006
4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的混合标准储备溶液（4.9），用空白样品提取液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液.当天配制.
4.11滤膜；0.45 pμm.
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有大气压化学电离源（APCI）.5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g.5.3组织接碎机. 5.4匀质机.5.5离心机：转速大于4000r/min.5.6超声波.5.7液体混匀器.5.9固相萃取装置. 5.8KD浓缩瓶：25mL.5.10旋转蒸发器.
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
取样品约500g用组织接碎机热碎，装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记.
将试样于-18C冰箱中保存.
7测定步骤
7.1提取
准确称取2g试样，精确至0.01g.置于50mL离心管中，加入8mL乙晴，以8000r/min均质20 s 4000r/min离心5min，上清液转移至50mL比色管中，另取一50mL离心管加人8mL乙腾，洗 涤匀质刀头10s，洗涤液移人前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，在液体混匀器上涡旋30s，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，离心管中的沉淀再加人5mL乙晴，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，于液体混匀器上涡旋30s，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL比色管，待净化.
7.2净化
将中性氧化铝净化柱（4.5）安置在固相萃取装置上，将上清液（7.1）小心倒入中性氧化铝净化柱中，控制流速在1mL/min~2mL/min，待样液完全流出后，再向净化柱中加入2mL乙晴淋洗净化柱，收集全部流出液，流出液转移至KD浓缩瓶中，于40C旋转蒸发至干，用1.0mL乙晴溶解残渣，超声10 min，过0.45μm滤膜（4.11）后，供液相色谱-申联质谱测定.
溶液. 称取2g阴性样品，按7.1和7.2步骤制备空白样品提取液，用于配制系列基质混合标准工作
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
a）色谱柱：lntersilC8-3色谱柱，5gum，150mm×4.6mm（内径）或相当者；b）柱温：40C； 216=由（d）流速：1.0mL/min:
e）进样量：50g.
7.3.2质谱条件
a）离子源：大气压化学电离源； b）扫描方式：负离子扫描；c）检测方式：多反应监测（MRM）：d）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体：使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求：f）定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞气能量见表1. e） 喷雾电压、去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度；
表1四种阿维菌素类药物的质谱参数
定性离子对 定量离子对 采集时间 去簇电压 碰撞气能量被测物名称 (m/2) (m/≥) /ms A/ /V873 7/567 2 28伊维菌索 873 7/837 5 873 7/567 2 200 44 28871 7/565 2 36阿维菌素 871 7/853 5 871 7/565. 2 200 47 31897 6/591 2 38多拉菌索 897 6/879 4 897 6/591.2 200 44 28912 5/876 6爱普瑞菌素 912 5/565 3 912 5/876 6 200 47 38
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在 对应的待测物.
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
%
相对离子丰度 >50 >20~50 >10~20 ≤10允许的最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50
7.3.3.2定量测定
在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作溶液进样（4.10），以峰面积为纵坐标，混合标准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内.外标法定量.四种阿维菌素的标准物质的多反应监测（MRM）色谱图参见图A.1.四种阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见表B.1.
7.4平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定.
7.5回收率试验
阴性样品中添加标准溶液，按7.1~7.2操作，测定后计算样品添加的回收率.
