中华人民共和国国家标准
GB/T21316-2007
动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
Determination of residues of sulfonamides in foodstuffs of animal origin-LC-MS/MS
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录.
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院.
本标准主要起草人：林黎明、张鸿伟、王风美、牟俊、彭涛、荣会、梁增辉.
动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
1范围
本标准规定了动物源性食品中磺胺类共计23种磺胺药物残留量高效液相色谱-质谱/质谱测定方法.
酰、磺胺密啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲密啶、磺胺唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺甲二唑、磺 本标准适用于肝、肾、肌肉、水产品和牛奶等动物源性食品中磺胺胖、甲氧苄啶、磺胺索嗜啶、磺胺醋胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪、磺胺多辛、磺胺甲唑、磺胺异唑、磺胺苯酸、磺胺地索辛、磺胺喹沙琳、磺胺苯哦唑和磺胺硝苯残留量的定性确证和定量测定.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法（neqISO3696：1987）
3原理
试样中加入C填料后研磨均匀，其中磺胺类药物残留用乙睛-水在微波辐照辅助下进行提取，用乙睛饱和的正已烷液液分配净化.用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量.
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682一1992规定的一级水.
4.1乙晴：色谱纯.4.2甲酸：优级纯.4.3正已烷：色谱纯， 4.4正丙醇.4.5无水硫酸钠：优级纯，500C灼烧4h，置于干燥器中备用.4.6C填料：40gm4.7硅藻土：化学纯.4.8乙腊-水（100030）溶液：量取1000mL乙睛，加人30mL水，混合均匀.4.9乙晴-水（11）溶液：将乙腊（4.1）与水按体积比1：1混合均匀. 4.10水-甲酸（9991）：准确吸取1mL甲酸（4.2）于1000mL容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀.4.11乙睛饱和正已烷：量取200mL正已烷（4.3）于250mL分液漏斗中，加于少量乙，剧烈振摇数分钟，静止分层后，弃去下层乙晴层即得.4.12标准物质：磺胺胖（sulfaguanidine，SGN）、甲氧卡啶（trimethoprim，TMP）、磺胺索密啶（sulfiso-midine，SIM）、磺胺醋酰（sulfacetamide，SAA）、磺胺密啶（sulfadiazine，SDZ）、磺胺吡啶（sulfapyri dine，SPD）、磺胺曝唑（sulfathiazole，STZ）、磺胺甲嘧啶（sulfamerazine，SMR）、磺胺唑（sulfamox-ole，SMO）、磺胺二甲嘧啶（sulfadimidine，SDM）、磺胺甲氧嗪（sulfamethoxypyridazine，SMP）、磺胺甲
二唑（sulfamethizole，SMT）、磺胺对甲氧密啶（sulfamethoxydiazine，SMD）、磺胺间甲氧嘧啶（sulfamonomethoxine，SMM）、磺胺氯达嗪（sulfachlorpyridazine，SCP）、磺胺多辛（sulfadoxine，SDX）、磺胺甲胺地索辛（sufadimethoxine，SDT）、磺胺喹沙啡（sulfaquinoxaline，SQX）、磺胺苯哦唑（sulfaphenazole， 晒唑（sulfamethoxazole，SMZ）、磺胺异唑（sulfafurazole，SFZ）、磺胺苯酰（sulfabenzamide，SBA）、磺SPA）、磺胺硝苯（sulfanitran，SAN)，纯度大于等于99%.4.1323种磺胺标准储备溶液：0.1mg/mL.分别准确称取按其纯度折算为100%的每种磺胺标准物质（4.12）10.0mg，用乙晴溶解并定容至100mL，该标准储备溶液一20C避光保存，有效期12个月，4.1423种磺胺混合标准中间溶液：10μg/mL.准确移取各种磺胺类标准储备溶液（4.13)10mL于 100mL棕色容量瓶中，用乙晴定容至刻度.该混合标准中间溶液在一20C避光保存，有效期6个月.4.1523种磺胺混合标准工作溶液：根据需要用乙晴-水（4.9）由混合标准中间溶液（4.14）稀释成合适的混合标准工作溶液，现用现配.
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱中联仪：配有电喷雾离子源.5.2高速组织接碎机.5.3均质器.5.4旋转蒸发器. 5.5氮吹仪.5.6涡旋混匀器.5.7分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台.5.8真空泵.5.9移液器：1ml.2ml. 5.10棕色鸡心瓶：150mL5.11样品瓶：2mL.带聚四氟乙烯旋盖，5.12大号玻璃研体.5.13pH计：测量精度士0.2.5.15棕色分液漏斗：100ml. 5.14离心机.5.16具螺旋盖聚四氟乙烯离心管：50ml.5.17超纯水仪，5.19超声波发生器. 5.18微波炉：家用，带有光波模式，功率700W.
6试样制备与保存
6.1肌肉、内脏、鱼和虾
份，分别装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样.将试样于一20C保存. 从原始样品中取出代表性样品，经高速组织捣碎机均匀将碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两
6.2肠衣
从原始样品中取出代表性样品，用剪刀剪成4mm²的碎片，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，分别装入洁净容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样.将试样于一20C保存.
6.3牛奶
从原始样品中取出代表性样品，用组织搞碎机充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样.将试样于4C避光保存.
7样品处理
7.1提取
7.1.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣
称取2g（精确至0.01g）试样置于玻璃研钵内，再称取约6g（精确至0.01g）C填料（4.6）加至试样上用玻璃轻轻研磨，使样品与填料混合均匀（色泽均一，状态分散），装于50mL具螺旋盖聚四氟乙照30s，3000r/min离心5min，将乙层移人100mL棕色分液漏斗中.离心后的沉淀物再加人 25mL乙晴摇匀，微波辅助提取30s，3.000r/min离心5min，合并乙晴提取液，待净化.
7.1.2牛奶
取2g（精确至0.01g）牛奶，置于玻璃研体内，加入6g（精确至0.01g）硅藻土（4.7），另加人6g（精确至0.01g）C填料（4.6），用玻璃轻轻研磨30s，使样品与填料混合均匀（色泽均一，状态分散），波炉中光波模式下微波辐照30s，于3000r/min离心5min.将乙层移入100mL棕色分液漏斗中. 装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯试管中，加入25mL乙睛-水溶液（4.8），旋涡振荡1min.放人家用微离心后的沉淀物再加人25mL乙晴摇匀，微波辅助提取30s，于3000r/min离心5min，合并乙晴提取液，待净化.
7.2净化
提取液中加人25mL乙晴饱和正已烷溶液（4.11）.振摇5min，将底层乙溶液移人150mL棕色鸡心瓶中，加入10mL正丙醇（4.4）.用旋转蒸发仪于45C水浴中减压蒸发至近干，氮气流吹干.准确 加人1mL乙-水溶液（4.9）.超声30s溶解残渣，将溶解液移人10mL棕色离心管中，加0.5mL乙晴饱和正已烷（4.11），涡旋振荡2min，于3000r/min离心5min，弃去正已烷溶液，取底层乙晴-水溶液过0.22um微孔滤膜，供高效液相色谱-质谱/质谱测定.
8测定
8.1标准工作曲线制备
用相应的空白样品基质提取液制备混合标准浓度系列、分别为10ng/mL 20ng/mL、100ng/mL、200 ng/mL、1 000 ng/mL(分别相当于测试样品中含有 5 μg/kg、10 μg/kg、20μg/kg、100 μg/kg500μg/kg的目标化合物）.按8.2和8.3规定测定并制备标准曲线.
8.2液相色谱条件
a）色谱柱：Intersil ODS-3，5um，150mm×4.6mm（内径），或相当者：b）流动相及洗脱条件见表1；
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min 流动相A（乙晴) 流动相B（0.1%甲酸）0 0 5 0 0.5 10. 99 5 9025. 0 50 5030 0 40 6030.5 0 5 99 540 0 0 5 99 5
c)流速：0.8mL/min;d）柱温：20C；e）进样量：20p.
