中华人民共和国国家标准
GB/T21320-2007
动物源食品中阿维菌素类药物残留量 的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of avermectins residues in foodstuffs of animal origin-LC-MS/MS
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口. 本标准起草单位：中国农业大学、中国检验检疫科学研究院.本标准主要起草人：沈建忠、丁双阳、李晓薇、夏曦、张素霞、江海洋、程林丽、曹兴元、彭涛、国伟.
动物源食品中阿维菌素类药物残留量 的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了动物源食品中阿维菌素类药物残留量的液相色谱-串联质谱检测法.本标准适用于牛肝脏和牛肌肉中埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素残留量的测定.本标准的方法检测限：埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素均为1.5ug/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696：1987)
3原理
用乙睛提取试样中的4种阿维菌素类药物，经C固相萃取柱和C，固相萃取柱净化后，用液相色谱-申联质谱法测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.2三乙胺. 4.1乙睛：色谱纯.4.3甲酸：色谱纯.4.4埃普利诺菌素标准品：纯度≥98%.4.5阿维菌素标准品：纯度≥98%.4.6多拉菌素标准品：纯度≥94.3%.4.8C固相萃取柱：500mg，3ml 4.10样品稀释液：水三乙胺（300.045，体积比）.4.12C固相萃取柱洗涤液：乙水三乙胺（30700.1.体积比）. 4.13埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准储备液：100yg/mL.分别准确称取0.010g埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准品（4.4~4.7）于四个100mL容量瓶，用乙晴溶解稀释至刻度.一20C保存六个月.4.14混合标准储备液：1yg/mL.取四种标准储备液（4.13）各1.0mL于100mL容量瓶中，用乙 稀释至刻度，4C保存三个月.4.15标准工作液：分别量取适量上述混合标准储备液（4.14），用乙晴稀释成浓度为1、5、10 20、50、100和 200ng/mL的系列标准工作液.
4.7伊维菌素标准品：纯度≥98%.
4.9C固相萃取柱；500mg，10ml.
4.11C固相萃取柱洗涤液：乙晴水三乙胺（40600.1.体积比）.
5仪器
5.2离心机.5.3振荡器.5.4涡动仪.5.5氮吹仪.5.6组织匀浆机.
5.1液相色谱-中联四级杆质谱仪：配有电喷雾电离源（electray spray ionozition，ESI）.
6试样制备与保存
取新鲜或解冻的动物组织，剪碎，10000r/min匀浆1min.-20C下保存.
7分析步额
7.1提取
心2min.取上清液.残渣用8mL乙腊重复提取一次，合并两次上清液.加30mL样品稀释液（4.10），误动混合均匀，为样品提取液，备用.
7.2净化
取C固相萃取柱，依次用5mL乙晴、5mLC固相萃取柱洗涤液（4.11）活化.将备用的样品提取液（7.1）过柱.用20mLC固相萃取柱洗涤液（4.11）淋洗，抽干：再用3mL正已烷淋洗，抽干.2mL乙晴洗脱，收集.加人4mL样品稀释液（4.10），混合均匀，备用.
10mLC，固相萃取柱洗涤液（4.12）淋洗，挤干；再用8mL正己烷淋洗，挤干；用2mL乙晴洗脱，收集 取C固相萃取柱，依次用5mL乙晴和C固相萃取柱洗涤液（4.12）平衡，取备用液过柱.用洗脱液.于50C下氮气吹干，加0.5mL乙晴溶解.过0.2μm滤膜，进样分析.
7.3基质添加标准工作液的制备
（4.15），氮吹、定容后作为基质添加标准工作液，供液相色谱-串联质谱仪测定.
7.4测定
7.4.1液相色谱条件
流动相：乙睛水甲酸（9550.1，体积比）. 色谱柱：C，150mm×2.1mm，粒径3μm，或相当者.流速：0.2mL/min柱温：室温，进样量：10L
7.4.2质谱参考条件
离子化方式：电喷雾离子源，正离子扫描（ESI十）.毛细管电压：3.2kV.离子源温度：120C.倍增器电压：650V. 雾化气：300C.碰撞气：氯气.其他参数见表1.
表1质谱参数设置
母离子 子离子 驻留时间/ 碰撤能量/ 锥孔电压/药物 (m/z) (m/z) eV V352 0°埃普利诺菌素 936 6 490 0 0 4 28 75327 4°阿维菌素 895 6 0 4 25 70449 3多拉菌素 921 5 353 2* 0 4 28 08449 0329 1* 0.4 0伊维菌素 897 5 753 3 25定量离子.
7.4.3液相色谱-串联质谱测定
根据样品溶液中药物的残留量，选择峰面积相近的标准工作液作为随行标样.对标准工作液和样品溶液等体积参插进样进行测定.4种药物的离子色谱图见附录A.
7.4.3.1定性测定
通过液相色谱保留时间与申联质谱选择离子共同定性.待测样品的保留时间与外标标准样品保留时间的相对偏差不大于2.5%.且与外标标准品相比，样品中待测组分两个定性子离子的相对丰度比不大于10%
7.4.3.2定量测定
分别取适量试样溶液和相应浓度的基质添加标准工作液，作单点校准，以色谱峰面积积分值定量.标准工作液及试样液中阿维菌素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内，试样液进样测定过程中应参插标准工作液，以便准确定量.标准溶液离子色谱图见附录A.
8结果计算与表达
按式（1）计算试样中阿维菌素类药物的残留量.
式中：
X试样中药物的残留量，单位为微克每千克（pμg/kg）：
A-试样特征离子峰面积；c基质标准溶液浓度，单位为微克每升（pg/L）； V-试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；A.-基质标准溶液特征离子峰面积；试样质量，单位为克（g）
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位.
