中华人民共和国国家标准
GB/T22951-2008
河豚鱼、鳗鱼中十八种 磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of 18 sulfonamides residues in fugu and eelLC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局.本标准主要起草人：贾光群、曹彦忠、张进杰、石玉秋、姚智慧、庞国芳.
磺胺类药物残留量的测定 河豚鱼、鳗鱼中十八种 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了河原鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物（见表2）残留量液相色谱-串联质谱测定方法.本标准适用于河原鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定.本标准的方法检出限均为5.0pg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-2004 ISO 5725-1:1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT）
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987.MOD）
3原理
河豚鱼、鳗鱼中磺胺类药物残留用乙脂提取，离心，上清液经无水硫酸钠脱水后，用氮气浓缩仪吹至近干，残渣用乙睛-0.01mol/L乙酸铵溶液溶解，用正已烷脱脂，过0.2μm滤膜后，样品溶液供液相色 谱-串联质谱仪测定内标法定量.
4试剂和材料
4.4甲酸：色谱纯.（4.8）混合均匀.（CAS：144-83-2）、磺胺甲基喀啶（CAS：127-79-7）、磺胺-6-甲氧嘧啶（CAS：1220-83-3）、磺胺甲噻二唑（CAS：144-82-1）、磺胺二甲嘧啶（CAS：57-68-1）、磺胺甲氧哒嗪（CAS：80-35-3）、磺胺对甲氧啶（CAS：
4.1水;GB/T 6682，一级.4.2甲醇：色谱纯. 4.3乙睛：色谱纯.4.5正已烷：色谱纯.4.6乙酸铵：优级纯4.7无水硫酸钠：经650C灼烧4h，置于干燥器中备用. 4.80.01mol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵（4.6）溶于1000mL水中.4.9定容液：乙睛-0.01mol/L乙酸铵溶液（322）.量取12mL乙睛（4.3）和88mL乙酸铵溶液4.100.1%甲酸溶液：吸取1.0mL甲酸（4.4)，用水稀释至1000mL. 4.11十八种磺胺类药物标准物质：磺胺唑啶（CAS：68-35-9）、磺胺曝唑（CAS：72-14-0）、磺胺吡啶
651-06-9）、磺胺氯哒嗪（CAS：80-32-0）、磺胺甲基异暖唑（CAS：723-46-6）、磺胺邻二甲氧喀啶（CAS：2447-57-6）、磺胺二甲异螺唑（CAS：127-69-5）、磺胺苯酰（CAS：127-71-9）、磺胺氯毗嗪(CAS：59-40-5).纯度≥99%. （CAS：102-65-8）、磺胺苯毗唑（CAS：526-08-9）、磺胺间二甲氧嘧啶（CAS：1037-50-9）、磺胺喹啉4.120.1mg/mL标准储备溶液：准确称取适量的每种磺胺类药物标准物质（4.11)，用甲醇（4.2）分别配成0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4C保存.4.135.0pg/mL磺胺类药物混合标准工作溶液：分别吸取各标准储备溶液（4.12）0.5mL移至10mL4.14磺胺内标物质：磺胺甲基异唑-D4、磺胺唑啶-D4、磺胺噻唑-D4.纯度≥99%. 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成5.0pg/mL混合标准工作溶液.该溶液在4C保存.4.155.0μg/mL磺胺甲基异呕唑-D4、磺胺壁啶-D4、磺胺曝唑-D4内标标准储备溶液：称取适量磺胺甲基异咳唑-D4，磺胺嘧啶-D4，磺胺唑-D4标准物质（4.14），用甲醇分别配成0.1mg/mL，该溶液在4C保存.4.16磺胺类药物混合内标工作溶液：分别吸取磺胺甲基异呕唑-D4，磺胺嘧啶-D4，磺胺噻唑-D4储备液.该溶液在4C保存.4.17基质标准工作溶液：吸取不同体积混合标准工作溶液（4.12）和4uL混合内标工作溶液（4.16），用空白样品提取液配成5.0ng/mL、10 0ng/mL、20 0ng/mL、50 0ng/mL、100 0ng/mL不同浓度的 基质标准工作溶液.当天配制.
4.18滤膜：0.2 μum.
5仪器
5.2分析天平：感量0.1mg0.01g 5.1液相色谱-中联质谱仪：配有电喷雾离子源.5.3离心管：50mL.5.4均质器.5.5液体混匀器.5.6离心机. 5.7氮气浓缩仪.5.8浓缩管：10mL
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内.密封，作为试样，标明标记.在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.2试样保存
将试样于-18C冷冻保存.
7测定步额
7.1样品制备
称取10g试样，精确至0.01g.置于50mL离心管（5.3）中，加人20μL内标工作溶液（4.16），然移至50mL容量瓶中，残渣再加人20mL乙，重复上述操作一次.合并提取液，用乙晴定容至刻度 后加人20g无水硫酸钠（4.7）和25mL乙晴（4.3），均质2min，以3000r/min离心3min.上清液转后，混匀.吸取10mL至浓缩管（5.8）中，在45C水浴中氮气吹至近干.准确加入1mL定容液（4.9）2
1mL正已烷，重复上述步骤，直至下层水相变成透明液体.取下层清液，过0.2μm滤膜（4.18）后、用液相色谱-串联质谱仪测定.
按上述操作步骤制备样品空白提取液.
7.2测定条件
7.2.1液相色谱参考条件
a) 色谱柱：Atlantis，3μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者；流速：0.2mL/min; 流动相：A：乙晴，B：0.1%甲酸溶液，C：甲醇，梯度洗脱条件见表1：c) d) 柱温：35C；
e）进样量：20pl.
表1流动相梯度条件
/回 A/% B/% C/%0. 00 10 0 80 0 70 0 10 03.00 8 00 20 0 35 0 55 0 10 0 10 012 00 70 0 20 0 10 012 01 10 0 80 0 10.017 00 10 0 80 0 10.0
7.2.2 质谱参考条件
a) 离子源：电喷雾离子源；c) 检测方式：多反应监测： 扫描方式：正离子扫描；d) 电喷雾电压：5500V；e) 雾化气压力：0.076MPa；f) 气帘气压力：0.069MPa;h) g) 辅助气流速：6L/min; 离子源温度：350C；定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2.
表2十八种磺胺类药物的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去电压
化合物中文名称 化合物英文名称 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量/V 去额电压/V251/156 （m/z) （m/z 23 55磺胺密啶 sulfadiazine 251/185 251/156 27 50磺胺噻唑 sulfathiazole 256/156 256/107 256/156 22 32 55 47250/156 25 50磺胺吡啶 sulfapyridine 250/184 250/156 25 60磺胺甲基嘧啶 sulfamethoxypyridazine 265/156 265/172 265/156 25 24 50 60sulfamonomethoxine 281/156 25 65硫胺-6-甲氧嘧院 281/215 281/156 25 50
