中华人民共和国国家标准
GB/T22953-2008
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、 多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量 的测定液相色谱-串联质谱法
Determination ofivermectin.abamectin，doramectin and eprinomectinresidues in fugu.eel and baked eel-LC-MS-MS method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口.疫局.本标准主要起草人：林峰、吴映璇、姚仰助、欧阳少伦、林海丹、庞国芳.
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、 多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量 的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了河豚鱼，鳗鱼和烤鳗中阿维菌素类药物伊维菌素（ivermectin）阿维菌素（abamectin）、多拉菌素（doramectin）和乙酰氨基阿维菌素（eprinomectin）残留量的液相色谱-串联质谱测定方法.
本标准适用于河原鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定.
本标准的方法检出限：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素均为5ug/kg
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
(GB/T 6379. 1-2004 ISO 5725-1;1994 IDT) GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT）
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008 1SO3696：1987 MOD）
3原理
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留用乙睛提取后，正已烷脱脂，中性氧化铝柱净化.样品溶液供液相色谱-申联质谱仪检测，外标峰面积法定量.
4试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1乙晴：色谱纯.4.2甲醇.4.3正已烷，使用前以乙精饱和. 4.4中性氧化铝：活度I级.4.5无水硫酸钠：经650C灼烧4h，置于干燥器中备用.4.6中性氧化铝净化柱：取一空的固相萃取柱管，下部填入少量脱脂棉，装人2g中性氧化铝（4.4），上部再填充4g无水硫酸钠，使用前装填.4.8100pg/mL标准储备液：准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标 4.7伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素标准物质：纯度>99%.准品（精确至0.1mg），用乙晴分别配制成100μg/mL的标准贮备液，一18C储存.
4.90.500μg/mL混合标准工作液：准确吸取0.500mL伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标准储备液（4.8）至100mL容量瓶中，以乙晴稀释并定容，此混合工作液的浓度为0.500μg/ml4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的混合标准工作液（4.9），用空白样品提取液配 -20C储存.制成不同浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制.
4.11滤膜；0. 2 yum.
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾电离源.5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g.5.3组织捣碎机.5.4匀浆机：转速大于或等于8000r/min.5.5离心机：转速大于4000r/min 5.6超声波水浴.5.7液体混匀器.5.8固相萃取装置.5.9氮吹仪.
6试样的制备与保存
取样品约500g用组织揭碎机捣碎，装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记，于一18C冰箱中保存.
制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化.
7测定步额
7.1提取
8 000r/min均质20 s，4 000r/min离心5min，上清液转移至50mL离心管中：另取-50mL离心管加 准确称取2g组织样品（准确至0.01g）至50mL离心管中，加人8mL乙晴（4.1），匀浆机上人8ml乙睛，洗涤匀浆刀头10s，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器上振荡30s，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL离心管中，乙晴定容至25.0mL刻度，混匀备用.
7.2净化
1min，4000r/min离心5min，弃去上层正已烷，重复此操作一次，下层乙溶液待用.
将中性氧化铝净化柱（4.6）安置在固相萃取装置上，准确移取10.0mL已脱脂的样品提取液至中性氧化铝净化柱中，控制流速在1mL/min~2mL/min，用2mL×2乙晴潜洗净化柱，收集全部流出 液，流出液转移至吹氮管中，50C下氨气吹至干，用1.00mL乙晴溶解残渣，并置超声波水浴中超声振荡10min.0.2um滤膜（4.11）过滤，供液相色谱-串联质谱测定.
7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Intersil C8-3柱，5μm，150mm×4.6mm（内径）或相当者；b）柱温：40C；c）进样量：25;
d）流速：0.8mL/min;
e）流动相：甲醇十水，梯度洗脱，见表1.
表1梯度洗脱程序
时间/min 甲醇/% 水/%0 00 3 00 100 75 2510 00 100 0 010 01 75 2515.00 75 25
7.3.2质谱参考条件
a） 离子源：电喷雾电离源（ESI）；检测方式：多反应监测（MRM）： 扫描方式：负离子扫插；c) d) 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体：使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度：e） 监测离子对和相应的参考质谱参数，见表2.
表2伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的监测离子对和相应的参考质谱参数
化合物名称 定性离子对 （m/z） 定量离子对 (m/=） 采集时间/ ms 去额电压/ V 碰撞能量/873 7/567 8 37伊维菌素 873 7/229. 2 873 7/229 2 100 75 50阿维菌素 871 7/565. 2 871 7/565 2 100 80 40871.7/229 3 54多控菌素 897 6/591. 4 897 6/591 2 100 70 38897 6/229. 0 51乙酰氨基阿维菌素 912 5/565. 4 912 5/270 0 912 5/565 4 100 82 49 37
7.3.3 液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内：且样品谱图中各组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可 判定为样品中存在对应的待测物.
以%表示
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度K 0S<X 20<K<50 10<K<20 K≤10允许最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.3.2定量测定 外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样（4.10)，以峰面积为纵坐标，基
