中华人民共和国国家标准
GB/T22979-2008
Determination of boscalid residues in milk and milk powder-GC-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B均为资料性附录.
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫局.
本标准主要起草人：潘国卿、张春艳、白国涛、郑书展、刘来俊、李红、张伟、庞国芳.
牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的测定 气相色谱-质谱法
1范围
本标准适用于牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的测定. 本标准规定了牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的气相色谱-质谱测定方法.本标准方法检出限：牛奶为0.010mg/kg：奶粉为0.080mg/kg.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 12004 ISO 5725-1;1994 IDT)
性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，1SO5725-2：1994，IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987 MOD)
3原理
气相色谱-质谱仪测定，外标法定量. 试样中的啶酰菌胺用乙晴提取，提取液经盐析、离心、浓缩和溶剂交换后，经凝胶渗透色谱净化，用
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.2乙酸乙酯：色谱纯. 4.1乙晴：色谱纯.4.3环已烷：色谱纯.4.4无水硫酸钠：650C灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用.4.5氯化钠.4.7啶酰菌胺标准品：纯度大于98%. 4.6乙酸乙酯-环已烷溶液：将乙酸乙酯（4.2）与环已烷（4.3）按照1：1体积比进行混合.4.8啶酰菌胺标准储备溶液：准确称取一定量的啶酰菌胺标准品，用乙酸乙酯-环已烷溶液（4.6）配成0.10mg/mL的标准储备溶液，于4C避光保存.4.9啶酰菌胺标准工作溶液：根据需要吸取适量的啶酰菌胺标准储备溶液，用乙酸乙酯-环己烷溶液4.10啶酰菌胺基质标准工作溶液：根据需要吸取适量的啶酰菌胺标准工作溶液，用阴性样品提取液配 （4.6）逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液，于4C避光保存.制成浓度范围在0.010μg/mL~0.50μg/mL的系列基质标准工作溶液，该溶液应现用现配.4.11滤膜：0.2 yum
5仪器和设备
5.2凝胶渗透色谱仪：配有凝胶渗透色谱柱. 5.1气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（E1）.5.3分析天平：感量0.1mg和0.01g.5.4均质器.5.5旋转蒸发器.5.6超声波清洗器. 5.7离心机：转速不小于10000r/min.5.8鸡心瓶：200mL.5.9分液漏斗：250mL.
6试样制备与保存
6.1试样的制备
6.1.1牛奶：取有代表性试样约500g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识.6.1.2奶粉：取有代表性试样约500g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识.准确称取12g乳粉试样（精确到0.01g）于250mL烧杯中，少量多次加人50mL煮沸并冷却到60C左右的水溶解， 冷却至室温后，移人100mL容量瓶中，用少量水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移人容量瓶，再用水定容到刻度，混匀，制备成奶粉复原乳试样.
6.2试样的保存
将试样于4C保存.
7测定步骤
7.1提取
准确称取10g牛奶试样（精确到0.01g）或量取10.00mL奶粉复原乳试样（6.1.2）于100mL离心管中，加人50mL乙（4.1），用均质器以15000r/min提取2min，用离心机以3.000x/min离心5min，上清液转人250mL分液漏斗中，残渣中再加入30mL乙晴（4.1），以15000r/min提取2min，以3000r/min离心5min，合并上清液于上述分液漏斗中，加人3g氯化钠（4.5），剧烈振荡3min.静置 分层后，除去分离的水层，乙睛层溶液通过装有10g无水硫酸钠（4.4）的漏斗过滤到200mL鸡心瓶中，用适量乙睛（4.1）淋洗无水硫酸钠及漏斗，收集全部滤液，在低于40C条件下旋转蒸发除去溶剂至干，残留物中加人约3mL乙酸乙酯-环已烷溶液（4.6）溶解后，超声波提取1min，提取液转人10mL容量瓶中，重复操作三次，合并提取液，用乙酸乙酯-环已烷溶液（4.6）定容至刻度，摇匀.
7.2凝胶渗透色谱净化
7.2.1条件
凝胶渗透色谱条件如下：
a）凝胶渗透色谱柱：300mm×10mm，内装Bio Beads S-X3填料或者相当者；b）检测波长：254nm；c）流动相：乙酸乙酯-环已烷溶液（4.6）：d）流速：5mL/min; e）进样量：5mL：f）开始收集时间：8.5min:g）结束收集时间：20min.
7.2.2净化
将上述提取液以3000r/min离心5min，上清液过0.45pm有机相滤膜（4.11），取5.00mL提取液注人凝胶渗透色谱仪的色谱柱中，以乙酸乙酯-环已烷溶液（4.6）洗脱，收集8.5min~20min的流出 液，在低于40C条件下浓缩至近干，用乙酸乙酯-环已烷溶液（4.6）定容到1.00mL，供气相色谱-质谱测定.
7.3阴性样品提取液的制备
取不含啶酰菌胺的阴性牛奶或者奶粉样品，按7.1和7.2步骤制备阴性样品提取液，用于配制啶酰菌胺基质标准工作溶液.
7.4气相色谱-质谱测定
7.4.1仪器条件
气相色谱-质谱条件如下：
a）色谱柱：HP-5MS石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25um）或相当者；b）色谱柱温度程序：100C保持1min，然后以30C/min升温至280C，保持8min; c）载气：氮气，纯度≥99.999%；d）载气流速：1.0mL/min；e）进样口温度：290C；f）进样量：1gL;g）进样方式：不分流进样，1.5min后打开分流阀和隔垫吹扫阀： h）电子轰击源：70eV；i）离子源温度：230C；j）GC-MS接口温度：280C；k）驻留时间：100ms;1）选择离子监测：定量离子为140，定性离子为142、342.定量离子与定性离子的相对丰度比值， 见表1.
表1定量离子与定性离子的相对丰度比值
项目 定量离子 定性离子 定性离子特征碎片离子（m/2） 140 342 142相对丰度 100 35 32
7.4.2定性测定
在相同的实验条件下进行样品测定时，如果样品中待测物质的色谱峰保留时间与标准品色谱峰保性离子的相对丰度与浓度接近的基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差 留时间相差在土2.5%以内，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且样品谱图中定不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在该种待测物.
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度K <X 20<K<<50 10<K<20 K≤10允许最大偏差 ±20 ±25 ± 30 ±50 7.4.3定量测定 基质标准工作溶液浓度为横坐标绘制，用标准工作曲线对样品进行定量，基质标准工作溶液和样液中啶 在仪器最佳工作条件下，对啶酰菌胺基质标准工作溶液（4.11）进行色谱分析，以峰面积为纵坐标，为11.2min，啶酰菌胺标准溶液的选择性离子色谱图和气相色谱-质谱图参见附录A中的图A.1、图A.2.
