中华人民共和国国家标准
GB/T22993-2008
Determination of eight tranquillizers residuesin bovine milk and milk powderLC-MS-MS method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口.疫局.本标准主要起草人：宋文斌、李一尘、李军、隋凯、董振霖、李百、王旭、赵守成、庞国芳.
牛奶和奶粉中八种镇定剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛奶和奶粉中乙酰丙嗪（cetopromaizine）、氯丙嗪（chlorpromazin）、氟哌啶醇（halo-peridol）、丙酰二甲氨基丙盼曝嗪（propionylpromazine）、甲苯噻嗪（xylazine）、阿扎哌隆（azaperone）及其代谢物阿扎账醇（azaperol）和B-阻断剂味唑心安（carazolol）残留量的液相色谱-中联质谱测定方法.
哌隆、阿扎呢醇、咔唑心安残留量的测定. 本标准适用于牛奶和奶粉中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟呢啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯曝嗪、阿扎
本标准方法检出限：牛奶中乙酰丙嗪、氯丙嗪、丙酰二甲氨基丙盼噻嗪、味唑心安均为0.5jg/L，甲苯噻嗪为0.25μg/L，阿扎哌隆为0.2μg/L，阿扎哌醇为0.15μg/L，氟呢啶醇为0.1μg/L，奶粉中乙酰丙嗪、氯丙嗪、丙酰二甲氨基丙盼噻嗪、味唑心安均为4.0pg/kg，甲苯曝嗪为2.0pg/kg，阿扎呢隆为 1.6μg/kg，阿扎呢醇为1.2μg/kg，氮眼啶醇为0.8μg/kg
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准.然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研 究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义
(GB/T 6379. 12004 ISO 5725-1; 1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987，MOD）
3原理
样品在碱性条件下用特丁基甲醚提取，提取液用磷酸盐缓冲液调成酸性，弃去有机相，水相再调成碱性用特丁基甲醚净反萃后浓缩定容，进行液相色谱-申联质谱仪测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1乙晴：色谱纯.4.3无水乙醇：色谱纯. 4.2甲醇：色谱纯.4.4盐酸：优级纯.4.5特丁基甲醚.4.7氢氧化钠溶液：5mol/L.称取50.0g氢氧化钠（4.6）用水溶解，定容到250mL. 4.6氢氧化钠.4.8磷酸二氢钾.4.9磷酸二氢钾溶液：1mol/L.pH=3.0，称取68.045g磷酸二氢钾（4.8）用水溶解，用盐酸（4.4）将
溶液的pH值调至3.0.定容到500mlL.
4.10甲酸铵（）由（）由909=H由 4.11甲酸：色谱纯.pH值调至4.0，定容至1000ml.4.13甲酸铵缓冲液：0.01mol/L，pH=4.0，取甲酸铵缓冲液（4.12）100mL用水稀释定容到1 000 mL.4.14流动相A；0.01mol/L甲酸铵缓冲液，pH=4.0（4.13），通过0.2m过滤器过滤. 4.15流动相B：乙晴（4.1）通过0.2pm过滤器过滤.4.16流动相C：甲醇（4.2）通过0.2um过滤器过滤.4.17混合流动相：将70mL流动相A，15mL流动相B以及15mL流动相C混合.4.18镇定剂及其代谢物和β阻断剂的标准物质：乙酰丙嗪马来酸，纯度大于等于99%：阿扎呢隆， 纯度大于等于99%：味唑心安，纯度：99%；氯丙嗪盐酸，纯度：99%；氟哌啶醇，纯度大于等于99%；丙酰二甲氨基丙嘧嗪盐酸，纯度：98%：甲苯噻嗪盐酸，纯度：99%：阿扎醇，浓度10.0pg/mL（甲醇）.4.19八种镇定剂标准储备溶液4.19.1乙酰丙嗪、阿扎哌隆、味唑心安、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩曝嗪、甲苯噻嗪标准储备 溶液：0.10mg/ml.称取适量的上述标准物质（4.18），分别用无水乙醇（4.3），配成0.10mg/mL的标准储备液.储备液避光在2C～4C条件下贮存.每年配制一次.4.19.2阿扎哌醇标准储备溶液：1.0pg/mL.准确移取1.0mL阿扎哌醇标准液（4.18）于10mL容量瓶中，用无水乙醇（4.3）定容至刻度，混匀，配成1.0μg/mL的标准储备液.储备液避光在2C~4C条件下贮存，每年配制一次.4.19.2），用乙晴配制成混合标准储备溶液，在2C～4C条件下贮存.4.21八种镇定剂混合标准工作溶液：根据每种镇定剂及其代谢物的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度的混合标准工作溶液.在2C～4C条件下避光贮存.注：称取标准物的质量是按纯度和含盐量修正过的质量.
5仪器
5.1液相色谱-中联四极杆质谱仪：配有电喷雾的离子源.5.2电子天平：感量0.1mg和0.1g. 5.3离心机：最大转速为10000r/min.5.4离心管：锥形底玻璃离心管，15mL和10mL具塞；锥形底聚丙烯离心管，50mL，具螺旋盖.5.5过滤器：聚四氟乙烯过滤器，0.2pm×13mm：尼龙薄膜过滤器，0.2xm×47mm.5.6液体分配器：1mL~10mL和5mL~50mL.5.7微量移吸器：10L~100L和100gL~1000pL. 5.8流动相过滤装置.5.9氮气浓缩仪.5.10高速涡流混合器.5.11振荡器. 5.12一次性移液管.5.13酸度计：测量精度为土0.02.5.14超声波仪.2
5.15一次性注射器：1mL.
5.16试样瓶：2.0mL
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
将牛奶和奶粉样品分别混合均匀.各自分出0.5kg作为试样，将分出的试样密封，并作上标记.
6.2试样保存
将试样置于4C条件下贮存.
7测定步骤
7.1提取
7.1.1牛奶样品
混合混合后加人400L5mol/L氢氧化钠溶液，并进行涡流混合30s.在80C士5C水浴中放置 称取牛奶试样2.00mL精确到0.01mL，放人50mL聚丙烯离心管中，加人200μL乙晴进行涡流1h.在此期间，要对每个测定样品进行两次涡流混合，1h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温.加人12mL特丁基甲醚，置于振荡器上高速振荡15min，离心15min（转速为5000r/min）.吸出上清液，将特丁基甲醚定量转移到干净的15mL的玻璃离心管内，待净化.
7.1.2奶粉样品
称取奶粉样品0.25g（精确到0.01g），放人50mL聚丙烯离心管中，加人1.75g水超声溶解得到复原乳，加人200L乙晴，以下步骤同7.1.1.
7.2净化
（5000r/min）.将特丁基甲醚层吸出弃去.在磷酸盐溶液中加人2mL特丁基甲醚，振荡5min，离心 在上述15mL离心管中加人1mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=3.0）3mL，振荡 10 min，离心10min5min（5000r/min），吸出特丁基甲醚层弃去.然后再在磷酸盐缓冲溶液中加人2mL特丁基甲醚重复上述步骤.加入1mL5mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加人10mL特丁基甲醚，振荡15min，离心5min（5000r/min）.定量吸取特丁基甲醚转移到一个干净的10mL的离心管中.在40C条件下用氮吹仪蒸发至干.在浓缩至干的提取物中加入1000μL流动相溶液（4.17），进行涡流混合，超声处理10min. 用0.2um×13mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液，将样液转移到试样瓶中.供液相色谱-申联质谱测定.
7.3色谱测定
7.3.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：Inertsil ODS-3，5μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者；b）柱温：35C：c）进样量：20gL;d）色谱柱总流量：200uL/min; e）流动相及梯度见表1.
表1流动相及梯度
步 运行时间/min 流动相A/% 瓷动相 B/% 流动相c/%0 0. 00 70 15 151 4 00 70 15 152 9.00 40 15 45
