中华人民共和国国家标准
GB/T23180-2008
饲料添加剂 2%d-生物素
Feedadditive-2%d-Biotin
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口.
本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、国家饲料质量监督检验中心
本标准主要起草人：赵小阳、李兰、虞哲高、王形、梅娜、杨志刚、王春琴、李永才.
饲料添加剂2%d-生物素
1范围
本标准规定了饲料添加剂2%d生物素产品的要求、试验方法、检验规则以及标签、包装、运输和贮存等要求.
本标准适用于以淀粉、期精或乳糖等为载体，用喷雾法和稀释法工艺制得的含有2%d生物素的饲料添加剂.
分子式：CHNOS
相对分子质量：244.31（2005年国际相对原子质量）.
结构式：
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备（GB/T602-2002，1SO6353-1：1982，NEQ）
GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备（GB/T603-2002，ISO6353-1:1982，NEQ)
GB/T6435饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定（GB/T6435-2006，ISO6496：1999，1DT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987.MOD）
GB10648饲料标签
《中华人民共和国药典）（2005年版二部）
3要求
3.1性状
本品为白色或微黄色的流动性粉末.
3.2技术指标
技术指标应符合表1规定.
表1技术指标
指标名称 指 标含量（以CHNO S计1/% 2.00干燥失重/% ≤8 0/(mg/kg) ≤3.0重金属(以 Pb 计)/(mg/kg) ≤10 0粒度 95%通过孔径为0.18mm（80目1分析筛
4试验方法
除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水符合GB/T6682中一级用水规定，标准溶液和杂质溶液的制备应符合GB/T602和GB/T603的规定.
4.1试剂和溶液
4.1.1乙晴：色谱纯.4.1.2三氟乙酸.4.1.3盐酸溶液：c（HCl)=3.0mol/L，量取250mL盐酸于100mL容量瓶中，用水稀释定容至4.1.40.05%三氟乙酸溶液：浓度为0.05%（体积分数），移取0.50mL三氟乙酸于1000mL容量瓶 刻度.中，用超纯水定容至刻度.4.1.5提取剂：三氟乙酸溶液（4.1.4）乙睛（4.1.1）=7525.4.1.6d生物素对照品：d生物素含量≥99.0%4.1.7d生物素标准储备溶液：称取约100mg（精确至0.00001g）生物素对照品（4.1.6），置于50mL 的容量瓶中，用提取剂（4.1.5）溶解，并稀释定容至刻度，握匀.该标准储备液每毫升含生物素2.0mg.4.1.8d生物素标准工作液：准确吸取d-生物素标准储备液（4.1.7)1.00mL于10mL容量瓶中.用
提取剂（4.1.5）稀释定容至刻度，摇匀.该标准工作液每毫升含生物素200μg.
4.2仪器和设备
实验室常用设备和：
4.2.1超声波水浴.4.2.2超纯水装置.4.2.3高效液相色谱仪，带紫外可调波长检测器（或二极管矩阵检测器）.
4.3鉴别试验
一致. 取试样溶液用高效液相色谱测定，样品溶液主峰的相对保留时间与对照溶液主峰的相对保留时间
4.3.1试液的制备
称取试样约0.5g（精确至0.0002g），置于50mL容量瓶中，加约40mL提取剂（4.1.5），在超声波水浴中超声提取15min，冷却至室温，用提取剂（4.1.5）定容至刻度，混匀，过滤，滤液过0.45μm滤 膜，供高效液相色谱仪分析.
4.3.2色谱条件
固定相：C柱，内径4.6mm，长250mm.粒度3zm.流动相：三氟乙酸溶液（4.1.4）乙晴（4.1.1)=7525.检测器：紫外可调波长检测器（或二极管矩阵检测器）.检测波长210nm. 流速：1.0mL/min.进样量：20L
4.4d-生物素含量的测定
4.4.1原理
（或二极管矩阵检测器）测定，外标法计算d-生物素的含量. 试样中的d生物素用溶剂提取后，注人反相色谱柱上，用流动相洗脱分离，紫外可调波长检测器
4.4.2分析步骤
4.4.2.1试液的制备
取试样溶液（4.3.1）供高效液相色谱仪分析.
4.4.2.2测定步骤
4.4.2.2.1色谱条件
同4.3.2
4.4.2.2.2定量测定
按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数向色谱柱中注人d生物素标准工作液（4.1.8）及试样溶液（4.3.1）.得到色谱峰面积响应值，用外标法定量.
4.4.2.3结果计算
4.4.2.3.1试样中d-生物素（CHNOS）含量X以质量分数（%）表示，按式（1）计算.
式中：
P试液（4.3.1）峰面积；
cd-生物素标准工作液（4.1.8）浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
50试液（4.3.1）稀释倍数；
P-d-生物素标准工作液（4.1.8）峰面积：
m一试样质量，单位为克（g）.
4.4.2.3.2平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字.
4.4.2.4重复性
同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差应不大于5.0%.
4.5干燥失重的测定
按GB/T6435测定.
4.6砷的测定
4.6.1称取试样1g（精确到0.0001g）于30.0mL瓷坩埚中.加入5mL150g/L硝酸镁溶液，混匀，慢加人10.0mL盐酸溶液（4.1.3），待激烈反应过后，煮沸并转移到发生器中，补加8.0mL盐酸，加水 于低温或沸水浴中蒸干，低温炭化至无烟后，转人高温炉于550C恒温灰化3.5h~4.0h，取出冷却，缓至40.0ml左右.
准确吸取3mL1.0μg/mL砷标准工作溶液于发生瓶中，加10mL盐酸，加水稀释至40mL，加人碘化钾溶液.
4.6.2以下按（中华人民共和国药典》（2005年版二部）砷盐检查法第一法（古蔡氏法）测定.
4.7重金属的测定
4.7.1称取试样1g（精确到0.001g）于30mL瓷堆埚中，低温炭化至无烟后，转人高温炉于550C恒温灰化3.5h~4.0h，取出冷却，缓慢加人10mL水，煮沸并过滤转移到比色管中，用水少量多次冲洗，定容25.0mL.
4.7.2以下按（中华人民其和国药典》（2005年版二部）重金属检查法第三法测定.
4.8粒度
于2.5g 称取试样50.0g，使用振动筛，5min后留在0.18mm孔径（80目）分析筛上的试样的质量不得大
