中华人民共和国国家标准
GB/T23193-2017代替GB/T23193-2008
茶叶中茶氨酸的测定 高效液相色谱法
Determination of theanine in tea-Using high performance liquidchromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准代替GB/T23193-2008《茶叶中茶氨酸的测定高效液相色谐法》.与GB/T231932008相比，主要技术差异如下：
测定原理及前处理过程完全不一样：
样品处理差异：0.5g样品加水100mL，80℃水浴浸提45min，修改为1.0g样品加沸水
100 mL 浸提30 min;
一无净化及衍生步骤，过0.45μm膜后，直接进样.
本标准由中华全国供销合作总社提出.
本标准由全国茶叶标准化技术委员会（SAC/TC339）归口.
本标准起草单位：中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院、国家茶叶质量监督检验中心、国家食品质量安全监督检验中心、泉州出人境检验检疫局综合技术服务中心、福建日春实业有限公司.
本标准起草人：周卫龙、徐建峰、刘小力、陆小磊、石维妮、叶美君、刘相真、黄伙水、王启灿.
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
GB/T 23193-2008.
茶叶中茶氨酸的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了用高效液相色诺法测定茶叶中茶氨酸含量的方法. 本标准适用于茶叶中茶氨酸的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8302茶取样GB/T8303茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定
3原理
210nm，用高效液相色谱仪进行测定，与标准系列比较定性、定量. 茶叶样品中茶氨酸经沸水加热提取、净化处理后，采用分离强极性化合物的RP-18柱，检测波长
4试剂
4.1除非另有说明，在分析中所使用试剂均为分析纯，用水为GB/T6682规定的三级水.
4.2乙晴：色谱级.
4.3茶氨酸标准品（L-theanine）：纯度≥99%.
4.4HPLC流动相
4.4.1流动相A：100%纯水.
4.4.2流动相B：100%乙晴（4.2）.
4.5茶氨酸标准储备溶液
4.5.1茶氨酸标准储备溶液
液每毫升含1mg茶氨酸.有效期为一年. 称取0.05g茶氨酸（精确到0.0001g），用水溶解后移入50mL容量瓶中-稀释至刻度，混匀，此溶
4.5.2茶氨酸标准使用液
分别准确吸取茶氨酸标准储备溶液（4.5.1)0.0mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0 mL，用水定容至10 mL 得到浓度分别为0.0 mg/mL、0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.05 mg/mL、0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL的茶氨酸标准使用溶液.有效期为一年. 4.60.45μm水相滤膜
5仪器
5.1高效液相色谱仪：包含梯度洗脱、紫外检测器及色谱工作站，
GB/T 23193-2017
5.2分析天平：感量0.0001g.5.3恒温水浴锅.5.4离心机：转速13000r/min.
6测定步骤
6.1样品处理
按GB/T8302的规定.
6.1.2试样制备
按GB/T8303的规定.
6.1.3干物质含量测定
按GB/T8303的规定.
6.1.4样品制备
茶叶样品经磨碎混匀后，称取1.0g（准确至0.01g）磨碎试样（或茶叶）于200mL烧杯中，加沸蒸馏水100mL.置于100C的恒温水浴锅（5.3）中浸提30min，过滤，转移到100mL容量瓶中，冷却后，用水定容至刻度，混匀.用0.45pm水相滤膜（4.6）过滤，或者取1mL样品，在13000r/min条件下高速 离心10min，然后进液相色谱分析.
6.2测定
6.2.1色谱条件
色谱条件如下：
色谱柱：RP-18（粒径5μm，250mm×4.6mm）; 流速：0.5 mL/min~1.0 mL/min;柱温：35℃±0.5℃；进样量：10L~20uL；检测波长：210nm； 梯度洗脱条件：如表1所示.
表1梯度洗脱条件
时间/min A/% B/% 备注0 100 0 分析10 100 0 分析12 20 80 柱 洗柱20 22 100 20 80 平衡40 100 0 0 平衡注：A：100%纯化水；B:100%乙睛.
6.2.2测定
待流速和柱温稳定后，进行空白运行.准确吸取10L茶氨酸标准使用液注射入HPLC，在相同的色谱条件下注射10gL测试液.测试液以峰面积定量.由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的茶氨酸的浓度.测试液中的茶氨酸的响应值均应在仪器测定的线性范围之内.色谱图参见附录A.
7分析结果的计算
茶叶中茶氨酸含量按式（1）进行计算：
.(1)
式中：
X样品中茶氨酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；V-最终定容后样品的体积，单位为毫升（mL）： （一样品浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；m样品的质量，单位为克（g）；样品的干物质含量（质量分数），%.
有效数字. 如果符合重复性（第8章）的要求，取两次测定的算术平均值作为结果，计算结果保留小数点后两位
8重复性
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
