中华人民共和国国家标准
GB/T23877-2009
Determination of citric acid.fumaric acid and lactic acid in feed acidifier-High performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录.
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口.
本标准起草单位：土海市饲料质量监督检验站、上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所.
本标准主要起草人：赵志辉、黄志英、顾赛红、杨海锋、林森、白冰、雷萍、风懋熙.
饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和 乳酸的测定高效液相色谱法
1范围
本标准适用于饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸含量的测定. 本标准规定了测定饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸含量的高效液相色谱法.本方法的定量限为：柠檬酸800mg/kg、富马酸8.0mg/kg、乳酸800mg/kg.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
3原理
试样中柠檬酸、富马酸和乳酸加水超声提取后，稀释至适当的浓度，用高效液相色谱仪进行测定，外标法计算柠檬酸、富马酸和乳酸的含量.
4试荆和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级规定的用水.
4.1乙晴：色谱纯.4.2磷酸：色谱纯.1 000 mL 4.30.1%磷酸溶液：准确吸取1.00mL磷酸（4.2），用符合GB/T6682规定的一级用水溶解并定容至4.4柠檬酸标准品：纯度≥99.5%.4.5富马酸标准品：纯度≥99.5%4.6柠檬酸标准储备液：准确称取柠檬酸标准品0.5025g于50mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻4.7富马酸标准储备液：准确称取0.1000g富马酸标准品于100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻 度.此溶液浓度为10.0mg/mL，4C条件下储藏，保存期3个月.度.此溶液浓度为1.0mg/mL，4C条件下储藏，保存期3个月.4.8乳酸标准储备液：制备和标定方法见附录A.4.9混合标准储备液：取10.0mL柠檬酸标准储备液（4.6），1.0mL富马酸标准储备液（4.7）和10.0mL4. 10混合标准工作液：准确吸取0.10mL、0.25mL、0.50mL、1. 00mL、2.50mL、5.00ml、 乳酸标准储备液（4.8）于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀.4C条件下储藏，保存期1个月.10.00mL混合标准储备液（4.9）于10.0mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀.此为混合标准工作液，
现配现用，
GB/T 23877-2009
5仪器和设备
5.2分析天平：感量为0.0001g. 5.1实验室常用仪器设备.5.3超声波清洗器.5.4微孔滤膜：孔径0.45μm5.5高效液相色谱仪（配有紫外检测器或二极管阵列检测器）.
6试样的制备
按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品1kg，四分法缩减取200g，装人磨口瓶中备用.
7分析步骤
7.1试样溶液制备
称取试样1g~5g（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，加60mL水，在50C水浴中超声提取20min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀，过滤.取滤液稀释，使最后稀释液中各种有机酸的浓度均落在4.10的工作曲线之内.取部分稀释液过0.45ym滤膜，滤液作为试样溶液.
7.2高效液相色谱条件
色谱柱：C柱，长250mm，内径4.6mm，粒度5m（极性色谱柱）.柱温：35C流动相：乙睛磷酸溶液（4.3）=2.597.5（体积比）.流速：1.0mL/min进样量：20 检测波长：210nm.
7.3液相色谱测定
分别取混合标准工作液（4.10）和试样溶液（7.1），按7.2列出的条件进行液相色谱分析测定.以混合标准工作液作多点校准，并用色谱峰面积积分值定量.测定中应调整试样溶液的浓度，使柠檬酸、富马酸和乳酸的积分值分别落在标准曲线的相应范围内.
8结果计算与表述
试样中柠檬酸、富马酸和乳酸的含量X，以质量分数表示，按式（1）计算：
式中：
("-由标准曲线得出的试样液中柠橡酸或富马酸或乳酸的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V-试样液总体积.单位为毫升（mL）； n稀释倍数；试样的质量，单位为克（g）.
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字.
9重复性
在重复性条件下，完成两个平行测定的结果的相对偏差不大于5%.
附录A
（规范性附录）
A.1试剂和材料
A.1.1乳酸；纯度约为90%. A.1.20.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液：按GB/T601配制和标定.A.1.31%酚酰指示剂溶液：1g酚酰溶于60mL95%乙醇中，用水稀释至100mL.
A.2仪器和设备
A.2.1电热套：500ml A.2.2圆底烧瓶：500mL.A.2.3球形冷凝管：100mL.
A.3制备和标定
称取乳酸约3.0g于500mL圆底烧瓶中，加270mL水，装上球形冷凝管，接通冷却水，加热回流氧化钠标准滴定溶液滴定至微红色30s不褪色，记录消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数（V）.乳酸标准储备液的浓度c，单位为微克每毫升（pg/mL）.按式（A.1）计算：
V ( .. 1 )
式中：
r一氢氧化钠溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）：V：一-空白试验时所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）； V-滴定乳酸溶液所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；V乳酸溶液的体积，单位为毫升（mL）；
90.08一乳酸的摩尔质量.
此标准储备液在4C下可保存3个月.
