中华人民共和国国家标准
GB/T23883-2009
Determination ofricinine in feeds-High performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准起草单位：中国农业大学、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）. 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口.本标准主要起草人：王宗义、张丽英、杨文军、贺平画、李冰颖.
饲料中麻碱的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了用高效液相色谱法测定饲料中麻碱（化学名为3-氰基-4-甲氧基-N-甲基-2-毗啶酮，分子式为CHNO，摩尔质量为164.16g/mol）的方法.
本标准适用于范麻柏、配合饲料和浓缩饲料中麻碱的测定.
本法的检测限为5mg/kg.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
用甲醇提取试样中范麻碱经固相萃取净化高效液相色谱分离，紫外检测，外标法定量.
4试剂和溶液
除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级用水规定.
4.1无水甲醇
移取1.0mL浓氨水溶液于100.0mL容量瓶中，用水定容至刻度.
移取30mL甲醇于100.0mL容量瓶中，用水定容至刻度.
4.5菌麻碱标准品
纯度大于99%.
4.6麻碱标准溶液
4.6.1范麻碱标准储备液：称取范麻碱标准品适量，用甲醇溶解，配制成浓度为1.00mg/mL标准储备4.6.2范麻碱标准工作液I：用甲醇逐次稀释范麻碱标准储备液至最终浓度分别为5.0pg/mL、 液，于一18C条件下储存.有效期为6个月.10pg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL和40μg/mL的标准工作液.有效期为 30 d 2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10 μg/mL和 20 μg/mL的标准工作液.有效期为 30 d.
4.6.3范麻碱标准工作液Ⅱl：用30%甲醇（4.4）逐次稀释储备液至最终浓度分别为0.5pg/ml、
5仪器与设备
5.1分析天平：感量为0.0001g.
GB/T 23883-2009
5.2离心机：转速大于3000r/min5.3恒温水浴.5.4涡旋振荡器.5.6固相萃取小柱：亲水亲油平衡型聚合物填料.30mg.1mL，或性能相当者. 5.5定量滤纸.5.7固相萃取装置，5.8氮吹仪.5.9高效液相色谱仪：配有紫外检测器.
6试样制备
按照GB/T20195的规定制备试样，粉碎过孔径0.45mm目筛，充分混匀，装瓶，备用.
7测定步骤
7.1提取
心管中，加20mL甲醇，拧紧盖子，于75C水浴中提取4h（约每30min取出于涡旋振荡器上振荡 准确称取菌麻柏试样0.5g（精确至0.0001g）或饲料试样5g（精确至0.001g）于50mL带螺口离30s）.取出于离心机上以3000r/min离心10min，将上层清液通过带有定量滤纸的50mL漏斗过滤于50mL容量瓶中，残渣再分别用20mL和10mL甲醇按上述方法提取10min，离心，合并提取液，最后用无水甲醇定容至刻度.
对于菌麻柏试样，取上述提取液过0.45m滤膜，可直接上机测定；饲料试样提取液则需作进一步净化处理，
7.2净化
移取提取液（7.1）2.00mL于10mL试管中，于氮气吹干仪上吹干，加人2.00mL氨水溶液（4.3），于涡旋振荡器上振荡30s.
将固相萃取柱（5.6）置于固相萃取装置上，依次用1.0mL甲醇和1.0mL水活化：加载1.00mL该试样溶液，控制流速不超过1.0mL/min：用1.0mL水淋洗小柱，抽干1min：最后用1.00mL30%的甲醇（4.4）洗脱加压，完全收集洗脱液到进样瓶中.
7.3测定
7.3.1色谱条件
流动相：乙晴水=1090.流速：1.0 mL/min.检测波长：308nm，
色谱柱：C填料，长150mm，内径3.9mm，粒度5pm，或相当者.
进样体积：20pl.
7.3.2定量方法
使用菌麻碱标准工作液I（4.6.2）.以峰面积对浓度的工作曲线，对范麻柏样品进行外标法定量；同样使用麻碱标准工作液Ⅱ（4.6.3），以峰面积对浓度的工作曲线，对饲料样品进行外标法定量.范麻碱标准品的色谱图参见附录A.
8结果计算
试样中范麻碱质量分数（mg/kg）按式（1）计算：
式中：
为根据工作准曲线计算的上机试样溶液荫麻碱浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V一为提取溶液体积，单位为毫升（mL）：
m为试样质量，单位为克（g）.
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字.
9重复性
在重复性条件下，完成两次平行测定结果的相对偏差不大于10%.
