中华人民共和国国家标准
GB/T24313-2009
Determination of olefin in beeswax-Gas chromatographic-mass spectrum method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B、附录C和附录D为资料性附录.本标准由中华全国供销合作总社提出. 本标准由全国蜂产品标准化工作组归口.本标准起草单位：中国农业科学院蜜蜂研究所、农业部蜂产品质量监督检验测试中心（北京）.本标准主要起草人：陈芳、赵静、陈兰珍、薛晓峰、李熠、吴黎明、周金慧、张金振、王鹏、黄京平.
蜂蜡中石蜡的测定 气相色谱-质谱法
1范围
本标准规定了蜂蜡中石蜡经类物质的气相色谱-质谱（GC-MS）测定方法.
本标准适用于中华蜜蜂（Apis cerana）蜂蜡（以下简称中蜂蜡）、意大利蜜蜂（Apix melliferaLigux-rica）蜂蜡（以下简称意蜂蜡）中石蜡烃类物质的测定.
本标准对蜂蜡中石蜡烃类物质的判别限为10%.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 12004 ISO 5725-1:1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT)
3原理
试样用石油醚提取，气相色谱-质谱仪检测，内标法定量，用统计学方法进行判别.
4.1石油醚：分析纯.4.2异三十烷：标准品，纯度>99%.4.3中蜂蜡：取中华蜜蜂的赘脾蜡，以1000mL水100g蜂蜡的比例加水煮沸，粗过滤去除大块杂质，待冷却后用刀片切除底部杂质，重复提纯一次.4.5石蜡：市售纯石蜡. 4.4意蜂蜡：取意大利蜜蜂的赞脾蜡，制备方法同4.3.4.6漆加不同比例石蜡的蜂蜡标准品制备：按石蜡与蜂蜡的质量比为1：9；2：8；3：7：4：6：515；1000mL水100g蜂蜡的比例加水煮沸，使蜂蜡和石蜡充分熔融并搅匀，冷却后取出风干.获得的样品中添加石蜡的比例为10%、20%30%、40%50%、60%70%80%90%. 4.7异三十烷烃标准工作液（1000mg/L）：准确称取50.0mg异三十烷烃标准品（4.2）于50mL容量瓶，用石油醚溶解并定容.一18C冰箱中保存.
5仪器
5.1气相色谱质谱仪.5.2分析天平：感量0.1g和0.0001g.5.3超声波仪.
GB/T 24313-2009
5.4涡旋混合器.5.5粉碎机.5.7移液器：200μL 1mL，5 mL 5.6电炉.5.8安瓶：1mL5.9烧杯：1L.5.10容量瓶：10mL.5.11统计软件（MatLab）：具有判别分析功能.
6试样制备与保存
6.1试样的制备
样品经冷冻后破碎至中等块状，粉碎机粉碎，混匀.
于4C冰箱中保存.
7测定步骤
7.1提取
称取冷冻粉碎样品及各种标准品50.0mg.置于10mL容量瓶中，用石油醚溶解并定容至刻度.分匀，供气相色谱-质谱测定.
7.2气相色谱-质谱测定
7.2.1气相色谱条件
色谱柱：HP-5ms，30m×0.25mm×0.25gm.或相当者.进样口温度：280C.升温程序：初始炉温为50C，持续1min；以20C/min升温至180C持续1min； 以15C/min升温至280C持续20min.进样体积：1pL，不分流进样.载气：高纯氮（99.999%），流量为1mL/min.
7.2.2质谱条件
传输管温度：280C. 离子源温度：250C.四极管温度：150C.扫描模式：全扫描.扫描范围：50~550.
7.2.3定性测定
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一>%0%>%%0%0<≤20%，允许土30%偏差：相对丰度≤10%，允许士50%偏差），则可判断样品中存在同一烃类或相关化 学物质. 7.2.4定量测定 本标准中气相色谱-质谱采用内标法定量测定.保证所测样品中烃类物质及相关化学物质的响应Z 值均在仪器的线性范围内.纯蜂蜡、石蜡标准品及样品色谱图参见附录A. 7.3平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验. 8结果计算 蜂蜡中正构烷烃含量采用内标法定量，各组分含量按式（1)计算： 式中： X.试样中被测组分含量，单位为毫克每升（mg/L）；m 加入内标物的浓度，单位为毫克每升（mg/L）：A组分i的峰面积； A 内标物的峰面积.注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字. 9结果判定 蜡的蜂蜡标准品的各组分进行判别分析，判别分析图参见附录C.当试样的结果最接近某一标准品时， 通过质谱分析确定了17个主要的组分，组分表参见附录B.用统计软件对样品及添加不同比例石即可以判定该物质与此类标准品为一类物质. 10精密度 本标准精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算的.结果参见附录D.
