中华人民共和国国家标准
GB/T 24800.3-2009
benzoyl peroxide and tretinoin in cosmetics by Determination of spironolacton high performance liquid chromatography method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由中国轻工业联合会提出. 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口.本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所.本标准主要起草人：王星、武婷、马强、张庆、肖海清、沈墩、康薇.
引言
产原料即组分添加到化妆品中.如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，则化妆品成品 本标准中的被测物质螺内酯、维甲酸是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质，不得作为化妆品生应符合《化妆品卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的、可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害.
目前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法.
化妆品中螺内酯、 过氧苯甲酰和维甲酸的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了化妆品中螺内酯、过氧苯甲酰和维甲酸的测定方法. 本标准适用于皮肤护理类化妆品中螺内酯、过氧苯甲酰和维甲酸的测定.本标准对于螺内酯、过氧苯甲酰的检出限均为2.5mg/kg，定量限均为5mg/kg；维甲酸的检出限为1mg/kg，定量限为2.5mg/kg.
2原理
以甲醇为溶剂，超声提取、离心，0.45μm的有机滤膜过涉，溶液注人配有二极管阵列检测器（DAD）的液相色谱仪检测，外标法定量.
3试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯.
3.1甲醇：色谱纯.3.2螺内酯，纯度不小于97%：过氧苯甲酰，纯度不小于97%：维甲酸，纯度不小于99.9%3.3螺内酯标准储备液：准确称取螺内酯0.1g.精确到0.0001g.于50mL烧杯中.加适量甲醇溶解后移入100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得螺内酯溶液浓度为1000mg/L的标准储备液.冰箱冷藏保存.甲醇溶解后移入100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得过氧苯甲酰溶液浓度为1000mg/L的标准储备液.注：由于过氧苯甲酰遇水易分解，每次使用时需现用现配.3.5维甲酸标准储备液：准确称取维甲酸0.1g.精确到0.0001g，于50mL烧杯中.加适量甲醇溶解 后移入100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得维甲酸溶液浓度为1000mg/L的标准储备液.冰箱避光冷藏保存.注：由于维甲酸对光十分级感，见光容易分解变质，操作应在避光条件下进行.醇定容至刻度，即得三种物质均为100mg/L的混合标准储备液.3.7标准工作溶液：用甲醇将上述标准混合溶液（3.6）分别配成一系列浓度1.0mg/L、2.0mg/L、5.0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的标准工作溶液，现用现配.3.80.1mol/L的氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.4g，精确到0.001g，于50mL烧杯中，加水溶解后转移至100mL容量瓶中.加水定容至刻度，即得0.1mol/L的氢氧化钠溶液. 3.90.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH6.5）:称取磷酸二氢钠（NaHPO2HO）3.9g，精确至0.001g.于50mL烧杯中，加水溶解，移人100mL容量瓶中.用水定容至刻度，混匀，即得到0.025mol/L的磷酸二氢钠溶液.用0.1mol/L氢氧化钠溶液（3.8）调节pH值至6.5.
4仪器
4.2微量进样器，10l 4.1液相色谱仪，配有二极管阵列检测器.4.3超声波清洗器.4.4离心机，大于5 000r/min.4.5溶剂过滤器和0.45um有机过滤膜.4.6具塞比色管，10mL.
5测定步骤
5.1样品处理
器中超声振荡20min，冷却后用甲醇稀释至刻度，混匀，取部分溶液放入离心管中，在离心机上于 称取化妆品试样约0.2g，精确到0.001g，于10mL具塞比色管中，加人8mL甲醇，在超声波清洗5000r/min离心20min，离心后的上清液经0.45μm有机滤膜过滤，诚液待测定用.
5.2测定
5.2.1色谱条件
5.2.1.1色谱柱：Kromasil Cs柱（250mm×4.6mm内径，5μm）; 5.2.1.2流动相：A：甲醇，B：0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH6.5）（3.9），梯度洗脱条件见表1.
表1方法的梯度洗脱条件
时间/min A/% B/%0 80 205 80 207 90 1013 90 10
5.2.1.3流速：1.0mL/min;5.2. 1.5检测波长：0~9.50 min 240 nm 9.51 min~13 min 335 nm; 5.2.1.4柱温：25C；5.2.1.6进样量：10L
5.2.2标准工作曲线绘制
200mg/L的混合标准工作溶液，按色谱条件（5.2.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的溶 /00/0/8/0//82/液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线.
标准物质色谱图参见附录A的图A.1
5.2.3试样测定
的保留时间和峰面积，由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的被测物浓度.样品溶液中的被测 用微量注射器准确吸取试样溶液（5.1）注人液相色谱仪，按色谱条件（5.2.1）进行测定，记录色谱峰物的响应值均应在仪器测定的线性范围之内.被测物含量高的试样可取适量试样溶液用流动相稀释后进行测定.
5.2.4定性确认
峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收图谱与标准品的 液相色谱仪对样品进行定性测定，进行样品测定时，如果检出螺内酯、过氧苯甲酰或维甲酸的色谱紫外吸收图谱相一致，则可初步判断样品中存在螺内酯、过氧苯甲酰或维甲酸.必要时，阳性样品需用2
