废弃牛奶乳源ACE抑制肽含量的测 定-HPLC-MS/MS法
Determination of ACE inhibitory peptide content in waste milk source by
HPLC-MS/MS
目次
前言. II1范围2规范性引用文件3术语和定义，4方法原理5试剂和材料6仪器设备7分析步骤8结果计算.9精密度10检出限和定量限附录A.
前言
本标准依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
本标准内容应符合强制性国家标准、行业标准及地方标准，若与其相抵触时，以国家标准、行业标准、地方标准为准.
本文件由宁夏质量技术协会归口.
本标准起草单位：宁夏计量质量检验检测研究院、蒙牛（银川）乳品有限公司、国智（宁夏）知识产权服务有限公司.
本标准主要起草人：谭勋哲、银鑫叶、刘杰、张静、田菊梅、简敏捷、吕晓东、方向阳、米江、赵燕、姚博伟、魏建设、段斌、刘杨琼、魏金娥、周慧、石亚东、王俊.
废弃牛奶乳源ACE抑制肽含量的测定-HPLC-MS/MS法
1范围
本标准规定了使用高效液相色谱-串联质谱联用（HPLC-MS/MS）技术对废弃牛奶乳源中特定血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽进行定性鉴定、确认和定量分析的方法.
食用的液态、固态或半固态废弃乳制品）中已知氨基酸序列的单一或多种ACE抑制肽进行定 本标准适用于对废弃牛奶及其制品（包括因品质、保质期、加工剩余等原因未用于直接性确认和定量分析.
2规范性引|用文件
适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本
GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法
NY/T4746-2025饲料中杆菌肽的测定高效液相色谱-串联质谱法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3. 1
废弃牛奶wastemilk
其液态或固态制品. 因不符合商品标准、超过保质期、加工剩余或其他原因未被直接用于食品消费的牛奶及
3.2
ACE 抑制肽 ACE inhibitory peptide
能够抑制血管紧张素转化酶（ACE）活性，从而具有潜在降血压功能的多肽片段.
3.3
特征离子对characteristicion pair
目标分析物在质谱中经碰撞诱导解离产生的，用于定性识别的母离子和子离子组合，通常选择响应强度高、干扰少的离子对.
3.4
保留时间retentiontime
目标分析物从色谱柱进样到出现色谱峰最大值所需的时间.
3.5
多反应监测multiplereaction monitoring（MRM)
一种串联质谱扫描模式，通过选择特定的母离子，并监测其碰撞后产生的特定子离子，实现对目标化合物的高选择性、高灵敏度检测.
4方法原理
试样经提取、净化后，采用高效液相色谱（HPLC）分离，目标ACE抑制肽在色谱柱
上实现与其他组分的分离.进入质谱（MS）检测器后，在电喷雾离子源（ESI）正离子模式下进行电离，采用多反应检测（MRM）模式对目标肽的特征离子对进行检测.以目标肽标准品的保留时间和特征离子对进行定性分析，以色谱峰面积外标法定量.
5试剂和材料
除另有说明外，试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682规定的一级水要求.
5.1标准品
分子量. 目标ACE抑制肽标准品：纯度≥98%（或已知的确切纯度）.应明确其氨基酸序列和
5.2试剂
5.2.1乙晴（CHCN）：色谱纯. 5.2.2甲醇（CHOH）：色谱纯.5.2.3甲酸（HCOOH）：色谱纯.5.2.4甲酸铵（HCOONH）：色谱纯. 5.2.5三氟乙酸（TFA）：色谱纯.5.2.6乙酸（CHCOOH）：色谱纯.5.2.7超纯水.
5.3溶液配置
5.3.1甲酸水溶液（0.1%，v/v）：准确量取1.0mL甲酸（5.2.3），用水稀释并定容至10005.3.2甲酸乙晴溶液（0.1%，v/v）：准确量取1.0mL甲酸（5.2.3），用乙睛（5.2.1）稀释 mL，混匀.并定容至1000mL，混匀.5.3.3甲酸铵水溶液（10mmol/L）：准确称取0.630g的甲酸铵（5.2.4），用超纯水溶解并 定容，混匀.5.3.4乙晴-水溶液（50%，v/v）：准确量取500mL乙腊（5.2.1）与500mL超纯水混合.5.3.5标准储备溶液（1.0mg/mL）：准确称取适量目标ACE抑制肽标准品（5.1），用0.1% 甲酸水溶液或水-乙晴混合溶液溶解并定容，于-20℃以下避光保存，有效期3个月.5.3.6标准工作溶液：根据需要，用初始流动相或样品基质空白溶液将标准储备溶液（5.3.5）逐级稀释成一系列不同浓度的标准工作溶液，现用现配.
6仪器设备
6.1高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪（HPLC-MS/MS），配有电喷雾离子源（ESI）.6.2分析天平：感量0.01mg和0.1mg.6.3超声波清洗器. 6.4涡旋混合器.6.5离心机：转速不低于10000rmin.6.7pH计. 6.6微量移液器.6.80.22μm微孔滤膜.6.9超滤离心装置.
7分析步骤
7.1试样制备
7.1.1样品预处理
