中华人民共和国国家标准
GB/T29368-2012
Technology regulation for spawn production of white jelly fungus
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由中华全国供销合作总社提出.
本标准由全国银耳标准化工作组归口.
本标准起草单位：古田县食用菌产业管理局、福建农林大学菌物研究中心、古田县兴华真菌研究所、古田县兴达银耳研究所、福建省标准化研究院.
张汉文、赵理、曾丽平、高华娟. 本标准主要起草人：阮淑珊、雷银清、朱坚、吴小平、黄聿善、邓优锦、温志强、彭冬祥、戴维浩、
银耳菌种生产技术规范
1范围
本标准规定了银耳菌种生产的术语和定义、要求、一级种制作、二级种制作、三级种制作、接种室（箱）消毒处理、培养室处理、培养期检查、菌种生产档案和标志、包装、运输.
本标准适用于银耳菌种生产.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T191包装储运图示标志NY/T528-2010食用菌菌种生产技术规程食用菌菌种管理办法（中华人民共和国农业部令第62号）
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
银耳white jelly fungus
（Tremella），其子实体由数片至十几片纯白或乳白色胶质瓣组成，形似菊花形、牡丹形或绣球形. 银耳隶属担子菌纲（Basidiomycetes），银耳目（Tremellales），银耳科（Tremellaceae），银耳属注： Tremella fuciformis Berk
3.2银耳菌丝mycelium ofwhitejelly fungus 银耳营养生长阶段，颜色白至黄色，纤细，具分枝及分隔，锁状联合明显.注：银耳菌种主要用银耳菌丝进行生产.
香灰菌cohabitant fungus 银耳生长过程中与银耳菌丝伴生，并能分泌黑色素的一种羽毛状真菌，注： Hyporylon spp
3.4白毛留myceliumpellet 银耳菌丝与香灰菌丝混生在培养基表面形成的白色菌丝团.
3. 5耳基basal tissue of white jelly fungus fruit body银耳子实体基部组织，呈桔黄色或垩白色，硬实，俗称蒂头.
9 混合培养mixculture将培养成熟的银耳菌丝与香灰菌丝按一定比例混合，制备成有生产价值的银耳菌种的过程，俗称
GB/T 29368-2012
交合.
在银耳耳基正下方，含有银耳菌丝和香灰菌丝的硬质层培养基.
基内分离substrate isolation
在基质块内分离出银耳菌丝和香灰菌丝混合培养物的过程.
分泌液liquid exudation
3. 10
银耳母种stockculture of Tremella fuciformis
经混合培养或基内分离得到的具有结实性的银耳菌丝和香灰菌丝的混合培养物，包括基内分离、混合培养的本屑种和混合培养的试管种，也称银耳一级种.
4要求
人员要求、场地选择、厂房设置和布局、设备设施应符合《食用菌菌种管理办法》和NY/T528一2010中第4章的规定.
5一级种制作
5.1培养基制作
5.1.1PDA培养基制作
5.1.1.1配方应符合NY/T528-2010中附录A的规定.5.1.1.2按常规方法进行培养基配制，装人试管，灭菌制成试管斜面.
5.1.2木屑培养基制作
配方：银耳适生树种（见附录A）木屑63%~73%、麸皮35%~25%、石膏粉2%，料水比1 1. 3~1 1. 5.
按常规方法，将培养基拌匀，装瓶，料高7cm~10cm，高压灭菌，121C～124C，维持2h.
5.2生产工艺
5.2.1混合培养生产工艺
5.2.1.1材料选择
选择培养28d左右，银耳子实体直径7em~8cm，朵形圆正，耳片白且厚，香灰菌丝生长有力.培养料表面黑色素分布均匀，无病虫害的银耳菌袋.
5.2.1.2银耳菌丝分离
5.2.1.2.1制备基质块
切除银耳子实体，取出基质块，并切成约1cm×1cm×1cm的硬方块做分离材料.
5.2.1.2.2基质块脱水
将基质块用无菌纱布包好，置于装有干燥剂的干燥器中脱水10d～20d，或置于阴凉通风处风干30d左右，直至香灰菌丝死亡.
5.2.1.2.3分离培养
在无菌条件下，切开分离材料，取内部约1mm的基质块至表面无积水的PDA斜面上，每支斜面放1块~3块，接种后至21℃土2C的温度下培养8d~10d
5.2.1.2.4转管
选取银耳菌落生长健壮、圆正的试管种，在无菌条件下，用接种针挑取菌落边缘约1.5mm²的菌丝块移至表面无积水的PDA斜面培养基上，于21C士2℃下培养8d~10d，备用.
5.2.1.3香灰菌丝分离
PDA斜面培养基上，于21℃土2℃温度下培养7d~10d. 在无菌条件下，从银耳菌袋远离基质块的培养料中直接钩取约0.5mm²菌丝块至表面无积水的
在无菌条件下，挑取菌落边缘约0.5mm”菌丝块至表面无积水的PDA试管斜面培养基上，于21℃±2℃温度下培养7d~10d
5.2.1.4混合培养
在无菌条件下，分别挑取直径为5mm～7mm的银耳菌丝块和直径为2mm的香灰菌丝块至菌种瓶的培养基表面中央位置，确保两菌丝块相互接触，于21C士2℃温度下培养30d～35d，选其中香灰菌丝长势均匀、吃料快、白毛团胶质化快、出耳早、朵型圆正、耳片仲辰好、无污染的菌种作为一级种备用.
5.2.2基内分离生产工艺
5.2.2.1材料选择
同5.2.1.1.
5.2.2.2银耳菌袋表面消毒
切除子实体，用75%酒精消毒菌袋表面.
5.2.2.3基质块制备
团置于菌种瓶的木屑培养基表面中央位置. 无菌条件下，用接种刀将菌袋中基质块表面老菌丝铲除，取中下层基质块，挑取约0.5mm²的基质
5.2.2.4增养
置于21C士2℃下培养，30d～35d后，选其中香灰菌丝生长健壮、分布均匀、分泌黑色素、白毛团胶质化快、出耳早、朵型圆正、耳片伸长好、无污染的菌种为一级菌种.
