中华人民共和国国家标准
GB/T30398-2013
Leather and fur-Chemical tests-Determination of allergenic disperse dyestuffs
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.本标准由中国轻工业联合会提出. 本标准由全国皮革工业标准化技术委员会（SAC/TC252）归口.本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、国家皮革质量监督检验中心（浙江）、中国皮革和制鞋工业研究院、国家鞋类检测中心.
本标准主要起草人：陈学灿、连小彬、张慧敏、赵立国、王玲霞、王晓霞、李小娅.
致敏性分散染料的测定 皮革和毛皮化学试验
1范围
本标准规定了染色皮革、毛皮及其产品中20种致敏性分散染料的测定方法.本标准适用于染色的皮革、毛皮产品.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法QB/T1267毛皮成品样块部位和标志 QB/T1272毛皮成品化学分析试样的制备及化学分析通则QB/T2706皮革化学、物理、机械和色牢度试验取样部位QB/T2716皮革化学试验样品的制备
3原理
样品经甲醇超声波提取后，用具有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪（HPLC/DAD）对萃取液进行定性、定量测定：或用高效液相色谱-申联质谱法（HPLC-MS/MS）进行定性、定量测定.
4试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水.
4.4乙酸铵.
4.6单组分标准储备溶液（200mg/L）：配制有效浓度为200mg/L的附录A所列的单组分分散染料标样标准储备甲醇溶液.
4.7用于HPLC/DAD分析的标准工作溶液（5mg/L）：
散橙1、分散橙3、分散橙37/76、分散棕1的单组分标准储备溶液中各取2.5mL置于同一容量瓶中，用 A组：从分散蓝1、分散蓝35、分散蓝106、分散蓝124、分散红1、分散红11、分散黄3、分散黄9、分甲醇定容至100ml.
B组：从分散蓝3、分散蓝7、分散蓝26、分散蓝102、分散红17、分散黄1、分散黄39、分散黄49的单组分标准储备溶液中各取2.5ml.置于同一容量瓶中-用甲醇定容至100mL.
4.8用于HPLC/MS/MS分析的标准溶液（2mg/L)：从单组分标准储备溶液中各移取1mL置于同一容量瓶中.用甲醇定容至100mL
GB/T 30398-2013
注：单组分的标准储备液见附录A标准工作溶液可根据需要配成其他合适的浓度.
5仪器和装置
5.1带旋盖（有聚四氟乙烯垫片）的管状硬质玻璃提取器（50mL）.5.2可控温的超声波浴（输出功率：420W，频率：40kHz），70C土2℃C.5.4聚四氟乙烯薄膜过滤头（0.45cm）. 5.3一次性注射器（2mL).5.5高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器（HPLC/DAD）.5.6高效液相色谱仪：配有两级质量分析检测器（HPLC-MS/MS）.5.7分析天平：精确至0.001g.
6分析步骤
6.1取样
6.1.1标准部位取样
6.1.1.1皮革：按QB/T2706的规定进行.6.1.1.2毛皮：按QB/T1267的规定进行.
6.1.2非标准部位取样
如果不能从标准部位取样（如直接从鞋、服装上取样），应在可利用面积内的任意部位取样，样品应具有代表性，对于毛皮样品，取样过程应避免毛被损失，保持毛被完好，并在试验报告中详细记录取样情况.
6.2样品的制备和萃取
称取1g试样，精确至0.01g，置于提取器（5.1）中.往提取器中准确加人10.00mL甲醇（4.1)，旋膜过滤头（5.4）过滤，用HPLC/DAD或HPLC-MS/MS分析. 紧盖子，将提取器置于70C的超声波浴（5.2）中提取40min，冷却至室温后，用0.45pm聚四氟乙烯薄
6.3HPLC/DAD方法
6.3.1HPLC/DAD分析条件
明对测试是合适的： 由于测试条件取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数.采用下列参数已被证
a）色谱柱：HC-C5xm，4.6mm×250mm或相当者：b）流动相A：甲醇；c）流动相B：0.005mol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（pH=6.6）；e）流速：1mL/min; d）柱温：50℃；f）检测器：二极管阵列检测器（DAD）：g）检测波长范围：200nm~700nm;h）定量波长:360 nm420 nm，460nm.570 nm.630 nm; i）进样体积：20L；j）梯度淋洗程序：见表1.
表1液相梯度淋洗程序
时间/min 流动相A/% 流动相 B/% 通变方式0 55 45 线性15 70 30 线性 线性20 22 80 95 20 5 线性25 56 5 线性28 55 45 线性
6.3.2HPLC/DAD定性、定量分析
分别取20gL测试液、用于HPLC/DAD分析的标准工作溶液（4.7）进行HPLC/DAD分析，通过比较试样与标样在规定的检测波长下（见附录A）色谱峰的保留时间以及紫外-可见（UV-VIS）光谱进行定性，外标法定量.
注：采用上述分析条件时分散染料标样的HPLC保留时间、色谱图和禁外可见光谱图参见附录A、附录B和附录C.
6.4HPLC-MS/MS方法
6.4.1HPLC-MS/MS分析条件
被证明对测试是合适的： 由于测试结果与使用的仪器和条件有关，因此不可能给出色谱分析的普遍参数，采用下列参数已
a） 色谱柱：Eclipse PlusC，1.8pm，2.1mm×100mm，或相当者；b）流动相A;0.01mol/L乙酸铵溶液（用乙酸调节pH=3.6）；流动相B甲醇；d）流速：0.2mL/min c）柱温：40℃；e） 进样量：2L;f） 梯度洗脱程序：见表2；g）离子化模式：电喷雾电离正负离子模式： h）质谱扫描方式：多反应监测；i）分辨率：单位分辨率；j）其他质语条件参见附录D.
表2梯度洗脱程序
流动相A/% 流动相B/% 遥变方式0 70 30 线性2 70 30 线性5 10 90 线性12.0 10 06 线性13 70 30 线性20 70 30 线性
