中华人民共和国国家标准
GB/T 30986-2014
生化制品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖 含量的测定液相色谱示差折光法
Method for the determination of glucose sucrose.maltose contents inbiochemical products-Liquid chromatography with refractiveindex detector
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
目 次
前言1范围3方法提要 2规范性引用文件4试剂和溶液5仪器与设备6试样的制备7分析步骤8结果计算附录A（资料性附录）葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准物质色谱图
前言
本标准由成都大学提出. 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）归口.本标准起草单位：成都大学中药化学实验室、中国测试技术研究院.本标准主要起草人：苟小军、谭和平、颜军、孙登峰、谢贞建.
含量的测定液相色谱示差折光法 生化制品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖
1范围
本标准规定了用液相色谱示差折光法测定生化制品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的方法.本标准适用于含糖胃蛋白酶、静脉注射用人免疫球蛋白、狂犬病人免疫球蛋白等生化制品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样经水溶解，加热除蛋白，离心，取上清液用体积分数40%乙晴水溶液定容至一定体积，经0.45pm滤膜过滤，用液相色谱示差折光检测器测定，保留时间定性、外标法定量.
4试剂和溶液
4.2乙晴：色溶纯. 4.1除非另有规定，使用的试剂为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.4.3体积分数40%乙晴水溶液：取40mL色谱纯乙晴与60mL水混合.4.4葡萄糖（CAS号：50-99-7）标准品：纯度≥99%4.5蔗糖（CAS号：57-50-1)标准品：纯度≥99%.4.6麦芽糖（CAS号：69-79-4）标准品：纯度≥99%. 4.7糖标准储备液：分别称取5g（准确至0.0001g）经减压干燥至恒重的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品，加适量体积分数40%乙水溶液溶解，各转移至100mL容量瓶中，用体积分数40%乙晴水溶液定容至刻度，摇匀.糖标准储备液质量浓度为50.0mg/mL.50mL容量瓶中，用体积分数40%乙晴水溶液稀释至刻度，制成质量浓度分别为0.5mg/mL，1.0mg/ml，
2.5mg/mL，5.0mg/mL 7.5mg/mL，10.0mg/mL的葡萄糖、蔗糖及麦芽糖标准溶液.
5仪器与设备
5.2分析天平，感量0.1mg. 5.1高效液相色谱仪：配示差折光检测器.5.3高速离心机，10000r/min
GB/T 30986-2014
5.4有机相微孔过滤器.0.45μm，5.5常用玻璃量器，A级.
6试样的制备
6.1蛋白热变性去除
准确称取0.5g（精确至0.0001g）研磨成粉末状的固体试样或准确移取1mL（精确至0.01mL）液体试样于20mL试管中，用40%乙精水溶液（4.3）10mL溶解，于沸水浴中加热10min.冷却后以10 000 r/min 离心 10 min.
6.2试液制备
将上清液（6.1）转移至50mL容量瓶中，用40%乙晴水溶液（4.3）定容至刻度，摇匀，待测.
对于不含蛋白的试样，直接称取0.5g（精确至0.0001g）研磨成粉末状固体试样或量取1mL（精确至0.01mL）液体试样置于50mL容量瓶中，用40%乙水溶液（4.3）定容至刻度，待测.
7分析步骤
7.1液相色谱参考条件
色谱柱：糖分析专用色谱柱，或氨基柱.流量：1.0mL/min 流动相：乙晴水（7822）.柱温：30℃检测器池温度：35℃.进样量：20 xL
7.2绘制标准曲线
分别吸取葡萄糖、蔗糖、麦芽糖系列标准溶液，用0.45μm滤膜过滤，注入高效液相色谱仪，进样20pL，进行测定、以各标准溶液浓度峰面积为织坐标，以标准溶液标准浓度值为横坐标，绘制各物质的标准曲线.用最小二乘法计算标准曲线公式，标准曲线的相关系数应不小于0.999.葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准物质色谱图参见附录A中图A.1.
7.3样品分析
吸取试料溶液（6.2），用0.45gm滤膜过滤，注入高效液相色谱仪，在与7.2相同条件下进行测定.根据色谱峰面积，利用线性回归方程计算试料溶液中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量.每个样品测定3次，以平均值作为测量结果.
7.4空白试验
除不加人样品外，均按上述步骤进行.
8结果计算
固体试样中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量（质量分数）按式（1）和式（2）计算：
