中华人民共和国国家标准
GB/T31408-2015
染发剂中非那西丁的测定 液相色谱法
Determination of phenacetin in hair dye-Liquid chromatography method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.
本标准由全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会（SAC/TC374）提出并归口.
本标准起草单位：广州质量监督检测研究院、肇庆迪彩日化科技有限公司、广州市白云联佳精细化工厂、国家化妆品质量监督检验中心（广州）福建省产品质量检验研究院、河北省食品质量监督检验研究院、浙江省质量检测科学研究院、广东圣薇娜精细化工有限公司.
何乔桑、汪毅、王斌、湛宏学、姜福全、赵劲松. 本标准起草人：谢文绒、陈立伟、吴玉銮、党华、罗海英、黄宇锋、郭长虹、韩婉清、洗燕萍、戴明、张岩、
染发剂中非那西丁的测定液相色谱法
1范围
本标准规定了染发剂中非那西丁的液相色诺测定方法.本标准适用于染发剂中非那西丁的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
3原理
试样中的非那西丁经甲醇水溶液提取，用液相色谱测定，外标法定量.
4位器和材料
4.1水：GB/T6682规定的一级水.4.2甲醇：色谱纯.4.4乙晴：色谱纯.4.5非那西丁标准物质：纯度≥99%；CAS62-44-2.4.8标准工作液：移取适量标准贮备液（4.7），用70%甲醇水溶液（4.6）逐级稀释成质量浓度分别为 至 10 mL
4.3正已烷：分析纯.4.670%甲醇水溶液：VxV=73.4.7标准贮备液（5.0mg/mL）：准确称取标准物质（4.5）50.0mg，用70%甲醇水溶液（4.6）溶解并定容0 μg/mL，0.5 μg/mL2.0 yμg/mL，10.0 μg/mL 20.0 μg/mL，50.0 μg/mL 的系列标准工作液.
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪或超高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器.5.2分析天平：精度为0.1mg.5.3涡旋振荡器.5.5离心机：转速不低于2500r/min. 5.4超声波清洗仪：超声功率250W.5.6滤膜：尼龙滤膜，孔径0.22μm
6分析步骤
6.1试样处理
6.1.1染发膏
旋振荡混匀，超声提取20min，定容至10mL，2500r/min离心4min，取2mL提取液转移至另一支 称取试样0.5g（精确至0.0001g）于刻度玻璃试管中.加人5mL~7mL70%甲醇水溶液（4.6），涡10mL玻璃试管中，加人3mL正已烷（4.3），涡旋振荡1min，2500r/min离心4min，取下层清液过0.22μm滤膜，待测.
6.1.2染发粉
称取试样0.05g（精确至0.0001g）于刻度玻聘试管中，加人5ml~7mL70%甲醇水溶液（4.6），涡旋振荡溶解，超声提取20min，定容至10mL，2500r/min离心4min，取上层清液过0.22μm滤膜，待测.
6.2测定
6.2.1高效液相色谱参考条件
高效液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：Ci，150mm×4.6mm（内径），5μm，或相当者；b）流动相：乙崩和水.VzsV*=37，等度洗脱；c）流速：1.0mL/min;d）温度：25C； e）检测波长：247nm；f）进样量；10pl.
6.2.2超高效液相色谱参考条件
超高效液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：亚乙基桥杂化C键合硅胶柱（BEHC），50mm×2.1mm（内径），1.7μm，或相当者；b）流动相：乙和水.VzV*=28，等度洗脱；c）流速：0.3mL/min; d）温度：25℃；e）检测波长：247nm；f）进样量：7μL.
6.2.3液相色谱测定
分别测定系列标准工作液（4.8）和试样溶液.以非那西丁的浓度为横坐标、相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线.
试样溶液中的非那西丁根据保留时间和紫外吸收光谱图定性.由试样溶液的峰面积，从标准曲线范围的试样溶液需用70%甲醇水溶液（4.6）稀释后再测定. 上查出对应的非那西丁的浓度.试样溶液中非那西丁的响应值应在标准曲线的线性范围内，超出线性
非那西丁标准溶液的高效液相色谱图和超高效液相色谱图参见附录A.
6.3平行试验
按6.1~6.2对同一试样进行平行试验.
6.4空白试验
除不加人试样外，均按6.1~6.2进行测定.
6.5添加试验
选取代表性基质试样，添加一定浓度的标准工作液，混合均匀，在室温下放置30min，然后按6.1~6.2进行测定，计算回收率.
7计算
按式（1）计算试样中非那西丁的含量，
(1)
式中：
试样中非那西丁的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；试样溶液中非那西丁峰面积对应的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）：C 空白试样中非那西丁的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V 试样质量、单位为克（g）； 试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；f 一回收率，%计算结果保留2位有效数字.
8检出限
8.1染发膏：高效液相色谱法的检出限为3mg/kg，超高效液相色谱法的检出限为1mg/kg.8.2染发粉：高效液相色谱法的检出限为30mg/kg，超高效液相色谱法的检出限为10mg/kg.
9精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
