中华人民共和国国家标准
GB/T 33681.1-2017
Methods to prepare samples for high-throughput gene sequencingPart 1:Preparing samples of animal tissues
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
目次
前言1范围2规范性引用文件3术语和定义县物5总则6实验室要求8试验步骤 7主要仪器与设备9质量评估附录A（资料性附录） 核酸的提取方法附录B（资料性附录） 质量评价 ..附录C（规范性附录） 实验室要求附录D（资料性附录） 片段化处理 I附录E（资料性附录）单分子扩增 13参考文献 14
前言
GB/T33681《高通量基因测序样本预处理方法》分为3个部分：
一第2部分植物组织样本预处理；
第3部分微生物组织样本预处理.
本部分为GB/T33681的第1部分.
本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草
本部分由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口.
瑞基因健康科技有限公司、武汉康昕瑞基因健康科技有限公司、中国测试技术研究院、上海交通大学医 本部分起草单位：深圳华因康基因科技有限公司、深圳市华因康高通量生物技术研究院、广州康昕学院附属瑞金医院、国家人类基因组南方研究中心、中山大学肿瘤防治中心.
本部分主要起草人：盛司潼、谭辉彪、李花、曾涛、杨杰斌、周李华、张俊、王升跃、陈功.
高通量基因测序样本预处理方法 第1部分：动物组织样本预处理
1范围
GB/T33681的本部分规定了高通量基因测序技术中对待检的动物组织样本进行预处理的技术要求.
本部分适用于高通量基因测序过程中对待检的动物组织样本的预处理.
本部分适用于血液、表皮拭子样本、新鲜动物组织样本（肌肉、脏器、毛发、骨骼）、甲醛固定动物组织样本、石蜡包埋动物组织样本.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T26798单光束紫外可见光光度计 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T26813双光束紫外可见分光光度计GB/T27025检测和校准实验室能力的通用要求GB/T30989高通量基因测序技术规程JJG646移液器 YY0569I级生物安全柜YY/T0657医用离心机医疗机构临床基因扩增管理办法卫生部2010年
物和植物组织的标准实施规程（Standard practice for preservation by freezing，freeze-drying，and low ASTME1342用冷冻、冷冻干燥和低温养护法保存细菌、真菌、原生生物、病毒、遗传要素以及动temperature maintenance of bacteria fungi protista viruses genetic elements and animal and planttissues)
3术语和定义
GB/T30989界定的以及下列术语和定义适用于本文件.
动物组织样本animal tissue sample
提供DNA或RNA的用于构建测序文库的动物组织材料.
一段人工合成的长度较短的能与平末端或黏性末端匹配（连接）的DNA片段.
GB/T 33681.1-2017
待测文库library to be tested
由两端连有已知的特定接头，中间为未知序列的核酸片段组成的核酸分子的集合.
待检样本sample to be tested
待测文库经单分子扩增后，固定在载体上的产物，可直接用于上机测序.
3.5
动物组织样本预处理animal tissue samplepretreatment
核酸的提取到待检样本的获得. 通过一系列实验步骤将动物组织样本处理成可直接用于基因测序的待检样本的过程，该过程是从
3.6
前处理流程forward flow
材料和（或）样本的操作原则，用于确保实验室样本、原材料和包括DNA扩增产物在内的经过处理的待检样本在整个实验过程中保持自然分离状态.
单分子扩增monomolecular amplification
以单分子核酸为模板进行核酸扩增，形成单一类型分子的过程.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.
DEPC：焦磷酸二乙酯（Diethy Pyrocarbonate)DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid） DNase：脱氧核糖核酸酶（Deoxyribonuclease）dNTPs：四种脱氧核苷酸（Deoxy ribonucleotide Triphosphate)EPCR：乳液聚合酶链式反应（Emulsion Polymerase Chain Reaction）PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction)RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid） RNase：核糖核酸酶（RNase Ribonuclease)TE：含乙二胺四乙酸的三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris-EDTABufferSolution）
5总则
5.1一般性要求
动物组织样本预处理的目的是制备可直接用于高通量基因测序的待检样本，从而分析动物组织样本的基因序列.动物组织样本预处理方法流程分为核酸的提取和待检样本的制备，其中待检样本的制备包括片段化处理、接头连接以及单分子扩增.
5.2核酸的提取
核酸提取是用物理、化学或生物酶的方法，释放动物组织样本中的核酸并对它进行纯化，充分去除动物组织样本中的蛋白质、脂类等PCR抑制剂以及提取核酸时加人的试剂，保证核酸的质量和浓度的稳定，以保证PCR反应的可重复性，所提取的核酸应是能满足下游分析要求的优质模板.常用的核酸提取方法参见附录A.
