中华人民共和国国家标准
GB/T35514-2017
Chemicals-Enchytraeid reproduction test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
目次
前言1范围2规范性引用文件3术语和定义4受试物所需信息5原理6参比物.7仪器设备 8试验系统 39试验程序10试验有效性11数据处理.12结果报告附录A（资料性附录） 土壤pH值的测定附录B（资料性附录）最大持水量的测定 11附录C（资料性附录）其他种类线蚓的试验操作 12附录D（资料性附录）线蚓的驯养条件 14附录E（资料性附录） 受试生物的计数方法 15附录F（资料性附录）数据统计评估的概括（NOEC的确定） 9参考文献
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准与经济合作与发展组织（OECD）化学品测试导则No.220（2004年）《线蚓繁殖试验）（英文版）技术性内容一致.
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251）提出并归口.
本标准起草单位：广东省微生物研究所、环境保护部固体废物与化学品管理技术中心、沈阳化工研究院、中国检验检疫科学研究院、广东中科英海科技有限公司.
本标准主要起草人：梅承芳、柳燕贞、曾国驱、刘纯新、林健辉、陈会明、郭琳琳、张静、张宝兰、李雪君.
化学品线蚓繁殖试验
1范围
本标准规定了化学品线蚓繁殖试验的术语和定义、受试物所需信息、原理、参比物、仪器设备、试验系统、试验程序、试验有效性、数据处理与结果报告.
本标准适用于评价受试物对土壤中线蚓繁殖量的影响.
本标准不适用于挥发性物质，如亨利常数或气/水分配系数大于1、或蒸气压超过0.0133Pa（25C）的物质.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T21851化学品批平衡法检测吸附/解吸附试验 GB/T21809化学品蚯蚓急性毒性试验
GB/T27860化学品高效液相色谱法估算土壤和污泥的吸附系数
ISO11268-2：2012土壤质量污染物对蚯蚓的影响对赤子爱胜蚓/安德爱胜蚓繁殖影响的测定(Soil qualityEffects of pollutants on earthworms-Determination of effeets on reproduetion ofEisenia fetidα / Eisenia andrei)
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
产生x%效应的浓度effect concentration for x%effect
EC.
与对照组相比，在给定的暴露时间内对受试生物产生x%效应的受试物浓度，以每单位试验土壤干重所含的受试物量表示.
3.2
非致死浓度nolethalconcentration
LC
在给定的时间内不会造成任何受试生物死亡的最高受试物浓度.以每单位试验土壤干重所含的受试物量表示.
3.3
半数致死浓度medianlethalconcentration
LC
在给定的时间内造成50%受试生物死亡的受试物浓度.以每单位试验土壤干重所含的受试物量表示.
3.4
全部致死浓度totallylethalconcentration
LC
在给定的时间内造成100%受试生物死亡的最低受试物浓度.以每单位试验土壤干重所含的受试物量表示，
3.5
最低可观察效应浓度lowestobservedeffect concentration：LOEC
能对受试生物产生统计学意义上的显著效应（p<0.05）的最低受试物浓度.以每单位试验土壤干重所含的受试物量表示.通常高于LOEC的试验浓度都应产生与对照组相比具有统计学意义差异的毒性效应.确定LOEC时，与上述要求偏离的任何情况都应在报告中进行解释说明. 9' 无可观察效应浓度noobservedeffectconcentration：NOEC 直接低于LOEC，且未观察到任何毒性效应的最高受试物浓度.与对照组相比，NOEC对应的受试物浓度在给定的暴露时间内对受试生物不产生统计学意义上的显著效应（p<0.05）. 3.7 繁殖率reproductionrate 在试验期间内每条成蚓所产幼虫的平均数. 4受试物所需信息 受试物所需信息包括： a）水中溶解度；b）lgK（土壤/水分配系数），试验方法按GB/T21851、GB/T27860；c）蒸气压； d）挥发性；e）在土壤中的其他环境行为，如光解和水解速率等. 5原理 将成蚂暴露于混合有不同浓度受试物的人工土壤中，试验可分为两步：当缺乏充分的信息时应首先开展预试验，暴露两周以致死率作为主要的评价终点.在正式的繁殖试验中，应同时评估亲本繁殖的幼体量和存活亲本的数量.正式试验的时间为6周.试验开始3周后，应移去成蚓并记录其形态上的变化.6周后，计算成蚓产茧后孵化得到的子代数量.通过比较含受试物的试验组与空白对照组中线蚓 的繁殖量，确定NOEC和/或EC（如ECEC）：即采用回归模型估算导致繁殖率下降x%时的受试物浓度.应使得EC （如EC、EC）包括在试验浓度范围内，以便通过内插法面非外推法得出EC，. 6参比物 可定期开展参比物试验，也可在每批试验中同时开展以验证不同时期试验生物的反应未发生显著变化.苯咪氨甲酯可作为参比物，已知该物质可对线蚓的存活和繁殖产生影响.已充分获知毒性数据的其他化学品也可用作参比物. 苯咪氨甲酯对线蚓繁殖的EC为1.2mg士0.8mg活性成分/kg干重.若试验组别中包括了阳性参2 苯咪氨甲酯制剂，活性成分含量为360g/L（32.18%），已通过比对试验得到验证.比对试验中，
