中华人民共和国国家标准
GB/T 35029-2018
Method based the microarray for mutation detetion of hereditary hearing loss
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.本标准由全国生物芯片标准化技术委员会（SAC/TC421）提出并归口.本标准起草单位：博奥生物集团有限公司. 本标准主要起草人：蒋迪、项光新.
基于微阵列芯片的遗传性 耳聋基因检测方法
1范围
本标准规定了基于微阵列芯片的常见遗传性耳聋基因检测的操作方法.关基因位点的检测. 本标准适用于临床辅助诊断、新生儿筛查、流行病学调查、健康人筛查等领域常见的遗传性耳聋相
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27990-2011生物芯片基本术语 YY/T1153体外诊断用DNA微阵列芯片YY/T1154激光共聚焦扫描仪
3术语和定义
GB/T27990-2011界定的术语和定文适用于本文件.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.
DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosine triphosphate)dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidine triphosphate） dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosine triphosphate）dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate）GJB2：缝隙连接蛋白β亚基2(gap junction beta 2）GJB3:缝隙连接蛋白β亚基3(gap junction beta 3) PCR：聚合酶链式扩增（polymerase chainreaction)SDS：十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate)SLC26A4：溶质转运蛋白 26 成员 4(solute carrier family 26 member 4)SSC：柠檬酸盐缓冲液（citrate buffer solution）
5原理
扩增及芯片杂交技术对中国人群中常见的遗传性耳聋基因突变位点进行检测. 根据现已发现并基于我国人群聋病流行病学调查确证的遗传性耳聋基因突变位点信息，采用多重
以人基因组DNA为模板，采用合适引物对相关基因位点所在基因片段进行扩增和荧光标记，然后依据碱基互补配对原则，与能够识别该序列的基因芯片进行杂交，最后进行芯片扫描和数据分析.由于针对所检测的多个位点的野生型和突变型分别设计了引物和探针，因此可以同时检测出多个位点的野生型和突变型结果.
6材料
6.1仪器设备
符合YY/T1154要求并获得医疗器械注册证书的微阵列芯片扫描仪、核酸微量离心机、离心管、恒温摇床、芯片洗干仪（备选）、微量加样器及加样器吸头、微量离心机、离心管、恒温摇床、芯片洗涤容 “
6.2试剂
本方法中需要的试剂可以是单独的试剂，也可以是已获得医疗器械注册证书的等效试剂盒中的试剂.
6.2.1水
本方法中所用水为GB/T6682规定的三级水，
6.2.2引物、探针
针对检测位点设计针对各位点相应的上游引物和下游引物，以及针对各位点的检测探针，常见的遗传性耳聋相关基因位点应包括表1中的基因位点及突变形式.
表1常见遗传性耳聋相关基因位点
突变所在基因 突变所在位点 突变位点描违35 176_191 del 16 35 del GGJB2 176 235 235 del C299 299_300 del ATGJB3 538 538 C>T线粒体 12S rRNA 1494 1494 C>T1555 1555 A>G1174 1174 A>T1226 1226 G>A1229 1229 C>TSLC26A4 1975 1975 G>C2027 2168 2027 T>A 2168 A>GIVS7-2 IVS7-2 A>GIVS15 5 IVS155 G> A
6.2.3TagDNA聚合酶缓冲液分子生物学级.
6.2.4dNTP溶液包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP的混合物.
6.2.5MgCI溶液分子生物学级.
6.2.6Taq DNA聚合酶
本方法中宜采用热启动TaqDNA聚合酶.
6.2.710% SDS分析纯.
6.2.8 20×SSC分析纯.
6.2.9去离子甲酰胺溶液分析纯.
6.2.1050×Denhart’s溶液分析纯.
6.3微阵列芯片
本方法中所使用的微阵列芯片应符合YY/T1153要求.
7样本采集与处理
7.1采集
7.1.1全血标本
况、饮食及健康状态不影响标本采集和结果检测.
7.1.2滤纸干血斑
当上游标本是人滤纸干血斑时，其采集应符合采血常规和管理规范.
7.1.3口腔拭子细胞
当上游标本是口腔黏膜细胞时，其采集方法应参照常规口腔黏膜细胞采集方法进行.
