GH
中华人民共和国供销合作行业标准
GH/T1531-2026
Determination of Dihydroxyacetone in Honey--HPLC Method
中华全国供销合作总社 发布
前言
起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中华全国供销合作总社提出.
本文件由全国蜂产品标准化技术委员会（SAC/TC601）归口.
公司、南京天嘉检测服务有限公司、中国蜂产品协会、秦皇岛市抚宁区农业农村局、河北工程大学、中 本文件起草单位：秦皇岛海关技术中心、上海冠生园蜂制品有限公司、北京百花蜂业科技发展有限国农业科学院农产品加工研究所.
本文件主要起草人：崔宗岩、李建勋、戴丽丽、闵才良、乔江涛、黄学者、祖铁红、王锦媛、刘彩萍、陈梅、王燕、谭丽蕊、孙国峰、贾光群、刘晓茂.
蜂蜜中二羟基丙酮含量的测定高效液相色谱法
1范围
本文件规定了蜂密中二羟基丙酮含量测定的高效液相色谱法.本文件适用于蜂蜜中二羟基丙酮含量的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
外检测法测定，外标法定量. 蜂蜜样品溶于水后，其中的二羟基丙酮经2 4-二硝基苯肼衍生，微孔滤膜过滤，高效液相色谱-紫
5试剂
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂和标准品
5.1.1乙晴（CHsN）：色谱纯.5.1.2冰乙酸（CHO）：色谱纯.5.1.3氢氧化钠（NaOH）5.1.4磷酸（HPO）：纯度≥85%.5.1.52 4-二硝基苯肼（CoHgNsOa）：CAS号：119-26-6.5.1.6二羟基丙酮（CHsO）：CAS号：96-26-4，纯度≥98%.
5.2溶液配制
5.2.1氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取8.0g氢氧化钠（5.1.3），置于200mL烧杯中，加入适量水溶解，冷却后转移至100mL容量瓶中，用水定容.
5.2.22 4-二硝基苯肼溶液（3mg/mL）：称取0.30g2 4-二硝基苯肼（5.1.5），转移至100mL容量瓶
中，加入乙晴（5.1.1）溶解，加入磷酸（5.1.4）1.5mL，用乙晴定容.5.2.3二羟基丙酮标准储备溶液（1.0mg/mL）：称取0.01g二羟基丙酮标准物质（5.1.6，精确至0.1mg），转移至10mL容量瓶中，加水溶解并定容，摇匀，置于冰箱2C～8C保存，有效期6个月.5.2.4二羟基丙酮系列标准工作溶液：精密量取二羟基丙酮标准储备溶液（5.2.3）适量，用水稀释分别配制成浓度为 2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、500 μg/mL的标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线（实际操作可根据样品含量适当调整标准工作溶液浓度，一般不少于5个浓度点）.标准工作溶液现用现配.
5.2.50.1%乙酸溶液：量取1mL冰乙酸（5.1.2）至1000mL容量瓶中，用水定容.
6仪器和材料
6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器.6.3 pH计.
6.2分析天平：感量0.01g和0.01mg.
6.4有机相过滤膜：0.22μm.
6.5容量瓶：10mL，100mL，1000mL.
7试样制备与保存
对无结晶的蜂蜜样品，将其搅择均匀：对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60"℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温.分出200g作为试样，置于样品瓶中，密封，并做上标记.试样于室温下保存.
8测定步骤
8.1样品前处理
称取0.5g试样（精确至0.01g）置于10mL试管中，加入5mL水，涡旋使试样完全溶解，再加入2.5mL2 4-二硝基苯肼溶液（5.2.2），混匀后于室温下衍生15min，用2mol/L氢氧化钠溶液（5.2.1）调节pH至6.0土0.5，转移至10mL容量瓶中并用乙晴定容，混匀.用0.22gum滤膜过滤，供高效液相色谱仪测定.
8.2测定
8.2.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Cis色谱柱（150mm×4.6mm，3μm），或性能相当者：b）流动相：A为乙，B为0.1%乙酸溶液，梯度洗脱条件见表1；d)柱温：40℃： c）流速：0.8mL/min:e)检测波长：371nm:
f进样量：10uL.
表1梯度洗脱条件
时间（min） 流速（mL/min） A (%) B (%)0 8°0 10 902 8′0 10 904 80 65 358 0.8 65 3501 0.8 90 1012 80 90 1014 80 10 9020 0.8 10 90
8.2.2标准曲线制备与液相色谱测定
分别精密移取二羟基丙酮系列标准工作溶液（5.2.4）各500uL至10mL试管中，按照8.1所述条件进行衍生化，按照8.2所述实验条件进行液相色谱检测.以二羟基丙酮衍生物峰面积为纵坐标，标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线.
样品溶液中二羟基丙酮衍生物的响应值应在标准工作曲线的线性范围内，样品溶液与衍生后的标准工作溶液等体积进样进行测定.在上述色谱条件下，二羟基丙酮衍生物的参考保留时间为7.0min，色谱图参见附录图A.1.
8.3空白试验
除不称取样品外，均按上述步骤进行.
9结果计算
按照色谱工作站自动计算或按式（1）计算：
式中：
X-样品中二羟基丙酮的含量，单位为毫克每干克（mg/kg）：
C-从标准工作曲线上得到的二羟基丙酮溶液浓度，单位为微克每毫升（ugmL）：
V-样品溶液等效体积，单位为毫升（mL）：
m一所称试样的质量，单位为克（g）.
